Direkter vs. indirekter ELISA: Die wichtigsten Unterschiede verstehen

Ein enzymgebundener Immunabsorbentest (ELISA) beinhaltet die Reaktion eines Antikörper-Enzym-Komplexes mit einem Antigen oder Antikörper, der auf einer festen Oberfläche immobilisiert ist. Bei der Inkubation des konjugierten Enzyms mit einem geeigneten Substrat entsteht ein Produkt. Die Bildung eines Produkts hilft, das Vorhandensein des Antigens oder Antikörpers nachzuweisen, und seine Menge liefert ein Maß für die Menge der Antigen-Antikörper-Reaktion, die stattgefunden hat. Der ELISA-Test kann in zwei Formen durchgeführt werden: direkt und indirekt.

Testformat

• Beim direkten ELISA-Test wird ein primärer Antikörper an den Wänden einer Mikrotiterplatte gehalten. Wenn die Probe, die den Antigen vermuten lässt, hinzugefügt wird, kommt es zu einer Antigen-Antikörper-Reaktion. Als Nächstes wird ein enzymgekoppelter sekundärer Antikörper hinzugefügt, der in der Lage ist, mit dem Antigen zu reagieren. Wenn Antigen in der Probe vorhanden ist, bindet es an diesen enzymgekoppelten Antikörper. Wenn ein farbloses Substrat hinzugefügt wird und sich eine Farbe entwickelt, deutet dies auf das Vorhandensein von Antigen hin. Beim indirekten ELISA wird das Antigen an den Wänden der Mikrotiterplatte gehalten. Wenn eine Probe, die Antikörper vermuten lässt, hinzugefügt wird, kommt es zu einer Antigen-Antikörper-Reaktion. Als Nächstes wird ein enzymgekoppelter sekundärer Antikörper hinzugefügt, der in der Lage ist, mit der ungebundenen Region des Antikörpers zu reagieren. Wenn das farblose Substrat hinzugefügt wird, führt dies zur Entwicklung von Farbe, wenn die verwendete Probe Antikörper enthält.

Einfachheit des Tests

• Eine große Auswahl an markierten sekundären Antikörpern ist kommerziell erhältlich. Darüber hinaus ist es möglich, mehrere primäre Antikörper in einer bestimmten Spezies zu erstellen und denselben sekundären Antikörper zur Detektion zu verwenden. Dies macht den indirekten ELISA einfach durchzuführen. Beim direkten ELISA müssen die primären Antikörper speziell vorbereitet werden, um mit dem spezifischen Antigen zu reagieren, das sich vermutlich in der Probe befindet. Dies macht den direkten ELISA im Vergleich zum indirekten Test nachteilig.

Schnelligkeit des Tests

• Der direkte ELISA-Test ist im Vergleich zum indirekten Test schnell, da er nur einen einzigen Antikörper verwendet. Der indirekte ELISA erfordert einen zusätzlichen Schritt der Inkubation mit einem zweiten Antikörper während des Testverfahrens, was zu einer Verzögerung bei der Ergebnisgewinnung führt.

Empfindlichkeit

• Der direkte ELISA-Test ist weniger empfindlich als die indirekte Form des Tests, da es viel weniger Signalverstärkung gibt. Darüber hinaus kann die Markierung des primären Antikörpers mit einem Enzym dessen Immunreaktivitätsprofil beeinträchtigen. Beim indirekten ELISA ist der primäre Antikörper nicht markiert und behält daher seine Immunreaktivität. Darüber hinaus hat jeder primäre Antikörper viele Epitope, die sich an den sekundären Antikörper binden können; dies ermöglicht eine Verstärkung des Signals und verbessert die Empfindlichkeit der Methode. Es besteht jedoch die Möglichkeit einer Kreuzreaktivität zwischen dem Antigen und dem sekundären Antikörper, was zu einem Fehler in den Ergebnissen führt. Eine solche Möglichkeit besteht beim direkten ELISA-Verfahren nicht.