Tracking-Farbstoff bei Gelelektrophorese: Funktion & Bedeutung

Was ist Gelelektrophorese?

Gelelektrophorese ist eine Methode, um DNA-Fragmente nach ihrer Größe zu trennen. Sie fügen Tracking-Farbstoff zu jeder DNA-Probe hinzu, um die Probe sehen zu können und den Fortschritt der DNA-Fragmente durch das Gel zu verfolgen.

Bedeutung

Um DNA-Fragmente zu trennen, um ihre Größe zu messen oder ein bestimmtes Fragment zu isolieren, geben Wissenschaftler DNA in ein Agarosegel, das in einer Lösung eingetaucht ist, die mit einem elektrischen Strom geladen ist. Der Strom drückt die DNA-Fragmente durch das Gel, und da das Gel porös ist, winden sich kleinere DNA-Fragmente schneller hindurch. Sie legen in derselben Zeit eine größere Strecke zurück als größere Fragmente.

Zweck

DNA ist farblos, wenn sie in einer Lösung in einem Reagenzglas ist. Um die Probe sowohl im Reagenzglas als auch im Gel besser sichtbar zu machen, fügen Sie der Probe einen farbigen Tracking-Farbstoff hinzu. Der Farbstoff beeinträchtigt die DNA überhaupt nicht.

Verfolgung

Der übliche Tracking-Farbstoff ist Bromphenolblau in einer 50-prozentigen Glycerinlösung. Bromphenolblau färbt die Probe leuchtend blau, sodass es einfach ist, seinen Fortschritt durch das Gel zu verfolgen. Wenn der Tracking-Farbstoff etwa 3/4 der Länge des Gels zurückgelegt hat, ist es Zeit, den elektrischen Strom abzuschalten.

Dichte

Der Tracking-Farbstoff ist aufgrund seiner hohen Glycerinkonzentration dicht. Dadurch sinken die DNA-Proben in die Ladeschlitze des Gels, anstatt in der Lösung über dem Gel, die den elektrischen Strom leitet, wegzutreiben.

Farbstoffmigration

Bromphenolblau wandert mit etwa der gleichen Geschwindigkeit durch eine Agaroselösung wie eine DNA-Strang mit 300 Basenpaaren. Wenn Sie den Fortschritt größerer DNA-Stränge verfolgen möchten, können Sie einen Tracking-Farbstoff mit Xylencyanol verwenden, der mit etwa der gleichen Geschwindigkeit wandert wie eine DNA-Strang mit 4.000 Basenpaaren.