Hoechst-Färbungsprotokolle: DNA- & RNA-Markierung für Mikroskopie & Zytometrie

Die Hoechst-Färbungen sind fluoreszierende Farbstoffe, die zur Markierung von DNA und RNA durch Fluoreszenzmikroskopie und Zytometrie-Techniken verwendet werden. Hoechst 33258 und Hoechst 33342 sind die am häufigsten verwendeten dieser Farbstoffe. Sie haben die Fähigkeit, sich an DNA-Moleküle zu binden, wodurch die Kerne und Mitochondrien unter ultraviolettem Licht fluoreszierend erscheinen. Protokolle für Hoechst-Färbung sind in biotechnologischen und genetischen Laboren gängige Praxis und umfassen Zellfärbetechniken mit sowohl Hoechst 33258 als auch Hoechst 33342.

Hoechst 33342 HSC Färbung und Stammzellreinigungsprotokoll

• Dieses Protokoll wird verwendet, um Zellen aus dem Knochenmark von Mäusen zu färben. Techniker bereiten eine Knochenmarkprobe mit HBSS+ Salzlösung, HEPES-Puffer und fetalem Kalbserum vor. Sie zentrifugieren die Lösung und fügen sie einem vorgewarmen DMEM-Medium hinzu. Anschließend wird der Hoechst-Farbstoff hinzugefügt. Die Lösung wird gemäß der Abteilung für Immunologie der University of Pittsburgh genau 90 Minuten in einem 98,6 Grad Fahrenheit Wasserbad platziert. DNA-Segmente erscheinen unter einem Zytometer fluoreszierend.

Hoechst 33342 DNA-Färbung

• Während dieses Protokolls suspendieren Techniker den Hoechst 33342-Farbstoff in destilliertem Wasser, fügen 2 Prozent fetales Kalbserum zur Zellprobe hinzu und halten den pH-Wert mit Hilfe einer Pufferlösung bei 7,2. Die Zellen werden dann eine Stunde lang bei 98,6 Grad F inkubiert und sofort mit einem Gerät namens Zytometer analysiert.

  Gefärbte DNA ist dann sichtbar und fluoreszierend, so das University of Michigan Health System.

DNA-Detektion mit dem DNA-bindenden Fluorochrom Hoechst 33258

• Dieses Protokoll verwendet ein Gerät namens Spektrophotometer, um DNA- und RNA-Segmente zu analysieren. Techniker verwenden Hoechst 33258 Arbeitslösung und Kalbthymus-DNA-Proben. Sie stellen auch eine separate Lösung her, die die DNA-Probe und ein chemisches Ethidiumbromid enthält. Später vergleichen sie die Zellfärbungsergebnisse in beiden Medien unter Verwendung eines Spektrophotometer, so Current Protocols in Cytometry.