Western Blotting mit Serum: Herausforderungen und Optimierungsstrategien

Die Verwendung von Serum für Western Blot ist möglich, aber anspruchsvoll aufgrund von:

• Hochreichende Proteine (Albumin, IgG) maskieren niederreichende Ziele.
• Proteasen, Glykoproteine, Lipide verursachen Hintergrund, Verschmieren.
• Chargenvariabilität.

Optimierungsstrategien

1. Hochreichende Proteine depletieren – Kommerzielle Säulen (Albumin/IgG-Entfernung).
2. Zentrifugieren und filtern – Entfernen von Trübern, Lipiden.
3. Optimal verdünnen – Balance von Signal vs. Hintergrund.
4. Blockieren – 5 % BSA oder entfettete Milch; längere Inkubation.
5. Antikörper-Titration – Konzentrationen von primären/sekundären Antikörpern optimieren.
6. Längere Waschschritte, stringente Puffer – Reduzieren nicht-spezifischer Bindung.
7. Positive/negative Kontrollen – gereinigtes Protein, Serum aus Knockout-Modell.

Wann Serum bevorzugt wird

• Autoantikörper nachweisen (Patientenserum als primärer Antikörper).
• Protein-Protein-Interaktionen im nativen Kontext untersuchen.
• Biomarker-Entdeckung, wenn Gewebe nicht verfügbar.

Für die meisten Anwendungen ist gereinigtes Protein oder Zelllysat überlegen. Verwenden Sie Serum nur, wenn nötig, mit rigoroser Optimierung.