Zellkryokonservierung: Ein umfassendes Protokoll zur Erhaltung

Die Erhaltung von Zellen durch Einfrieren ist für Forschung, Veterinärmedizin und Tierzucht unerlässlich, da es ermöglicht, Zellen über lange Zeiträume zu lagern. Die gewählte Einfriermethode muss jedoch Schäden an der Zelle reduzieren oder verhindern. Das Kryoprotektionsmittel und die Methode können vom Zelltyp abhängen.

Vorbereitung

Zellen sollten eingefroren werden, wenn sie gesund und aktiv wachsend sind und eine Vitalität von 90 Prozent aufweisen. Sorgfalt sollte bei der Handhabung walten und Hochgeschwindigkeitszentrifugation sowie starkes Pipettieren oder Absaugen sollten vermieden werden, um die Vitalität zu erhalten und Zellschäden zu verhindern.

Kryoprotektion

Ein Kryoprotektionsmittel wird als Ersatz für intrazelluläres Wasser verwendet. Das Mittel verhindert Eiskristalle und Dehydratation in den Zellen. Sterilisiertes Glycerin und sterilisiertes Dimethylsulfoxid werden oft in einer Konzentration von 5 bis 15 Prozent (Volumen pro Volumen) verwendet, verdünnt entweder in fetalen Kälberserum oder Wachstumsmedium, je nach Zelltyp.

Einfrieren und Lagern

Zellen in der Einfriermischung sollten langsam gekühlt werden. Wenn kein programmierbarer Gefrierschrank verfügbar ist, können Kryovials in Taschentuch eingewickelt oder in Styropor gelegt werden, was den Einfrierprozess verlangsamen kann. Zellen sollten 24 Stunden bei minus 80 Grad Celsius aufbewahrt und dann in flüssigen Stickstoff für die Langzeitlagerung überführt werden.

Auftauen

Eingefrorene Zellen sollten schnell aufgetaut werden. Ein Wasserbad bei 37 Grad Celsius kann verwendet werden. Sorgfalt sollte jedoch bei Zellen, die in flüssigem Stickstoff gelagert werden, walten, da flüssiger Stickstoff in die Vials eindringen und beim Auftauen explodieren kann. Die Einfriermischung sollte in Wachstumsmedium verdünnt werden. Die Zellvitalität sollte mit dem Farbstoff Trypanblau bewertet und die Zellen wie normal kultiviert werden.