Retrovirus-Infektion: Protokolle und Mechanismen

Retroviren enthalten ein RNA-Genom, das in einer Kapside und einem Lipidhülle eingekapselt ist, und enthalten Polypeptidketten, die ihnen helfen, sich an Rezeptoren in den Membranen von Wirtszellen zu binden, die sie infizieren. Während die erbliche Information der meisten Zellen in DNA kodiert ist, ist die von Retroviren in RNA enthalten; Retroviren tragen auch das Enzym Reverse-Transkriptase, das es ihnen ermöglicht, sich an die Wirts-DNA zu binden. Bestimmte Protokolle werden von Labors bei der gezielten Infektion der DNA-Zelle mit diesen Viren befolgt.

Vorbereitung des Labors

Bestimmte Laborgeräte und -materialien sind erforderlich, um den Prozess der Retroviral-Infektion zu unterstützen. Geräte umfassen 1 Pipettenhilfe, 1 Pipettenman, 1 Gewebekulturhaube, 37-Grad-Celsius- und 32-Grad-Celsius-Inkubatoren sowie eine Eppendorf-Zentrifuge. Materialien umfassen Gewebekulturplatten, eine Einweg-Pasteur-Pipette, qualifizierten retroviralen Überstand, filtriert sterilisiertes Polybren und filtriert sterilisiertes Protaminsulfat.

Vorbereitung der Zelle für die Infektion

Vor der Infektion müssen Zielzellen in einer Gewebekulturplatte aufgeteilt und über Nacht in einem 37-Grad-Celsius-Inkubator mit fünf Prozent CO2 inkubiert werden. Der Zweck der Inkubationsperiode ist es, Zellen zu schaffen, die zu 50 Prozent konfluenz sind. Die Vorbereitung der Zellen im Voraus ist notwendig, um sicherzustellen, dass die Zellen für den Infektionsprozess optimiert sind. Das Nolan Lab an der Stanford University empfiehlt, dass Zellinfektionen immer damit beginnen, NIH 3T3-Zellen zu infizieren, um die Ergebnisse des Tests zu optimieren.

Infizieren der Zellen

Nach Ablauf der Inkubationsperiode sollten die Forscher sicherstellen, dass die Zellen sowohl gesund als auch von der richtigen Konfluenz sind. Mit der Gewebekulturhaube wird das zelluläre Material abgesaugt und ein viraler Überstand auf die Zellen aufgetragen. Nach dem Auftragen sollte die Platte sanft hin und her geschaukelt werden, um sicherzustellen, dass er gleichmäßig verteilt ist. Die Zellen sollten dann durch Spin-Inokulation infiziert werden, indem sie in die Eppendorf-Zentrifuge gelegt und bei 2.500 U/min für neunzig Minuten bei einer Temperatur von 30 Grad Celsius geschleudert werden. Danach sollten die Zellen ein bis zwei Tage bei 32 Grad Celsius inkubiert werden. Das Virus wird dann durch die extrahierten Zellen ersetzt und in den Inkubator gestellt, um drei bis sieben Tage nach der ursprünglichen Infektion analysiert zu werden.