Koloniebildende Einheit, oder CFU, ist ein Maß für die Anzahl von Mikroorganismen. Im Gegensatz zu anderen Methoden, wie der direkten Mikroskopie, bei der tote und lebende Mikroorganismen berücksichtigt werden, ermöglichen CFU-Protokolle Biologen, nur lebensfähige Zellen zu zählen. Standardmaßeinheiten sind Koloniebildende Einheiten pro Milliliter für Flüssigkeiten und Koloniebildende Einheiten pro Gramm für Feststoffe. CFU-Protokolle werden in der Biotechnologieforschung weit verbreitet verwendet.
CFU-MK-Assay bei akuter Thrombozytopenie
- Megakaryozyten, oder MK, sind eine Art von Knochenmarkzellen, die Blutplättchen produzieren. Dieses Protokoll wird in Studien zur Thrombozytopenie verwendet, einem Zustand, der mit niedrigen Blutplättchenwerten zusammenhängt. Vor dem Zählen bereiteten Techniker den CFU-MK-Test mit humanen Nabelschaftblutzellen, Iscove's modifiziertem Dulbecco-Medium, boviner Kollagenlösung, serumfreiem Medium mit Proteinen namens Zytokinen, Antikörpern anti-TNP, anti-GPIIb/IIIa und anti-Maus-IgG, Evans-Blue-Kontrastfarbe, Tris/NaCl-Puffer und bovinem Serumalbumin vor.
Kulturmedium für Kolonie-Assay
- Techniker bereiten diesen Assay mit humanem Plasma, der Chemikalie 2-Mercaptoethanol, leukozytenkonditioniertem Medium, dem Hormon Erythropoetin und Iscove's Modified Dulbecco's Medium vor, gemäß Jeffrey W. Pollard in "Basic Cell Culture Protocols." Diese Lösung wird dann mit den zu analysierenden Zellproben gemischt. Methylcellulose wird hinzugefügt, und die Proben werden für 14 Tage in einer feuchten Atmosphäre mit 5 Prozent Kohlendioxid inkubiert.
Migration von CFU in CD34-Zellen
- CD34, oder Cluster-Differenzierungsmoleküle, sind auf bestimmten menschlichen Immunabwehrzellen vorhanden und wirken als kontrollierter Adhäsionsfaktor auf den Zellmembranen. Zellen, die dieses Protein enthalten, können die Fähigkeit haben, von einem Gewebe zum anderen zu migrieren. Während dieses Protokolls waschen Techniker Proben von migrierten CD34-Zellen, um Zytokine-Proteine zu entfernen. Die Proben werden dann zentrifugiert und in einem Medium mit Wachstumsfaktoren neu aufgeschüttelt. Die Kolonien werden zwei Wochen später gezählt.
