Insulin wird fast ausschließlich von den pankreatischen β-Zellen in den Inselzellen von Langerhans produziert. Diese Zellen erfühlen den Blutzucker über GLUT2/Glucokinase und sezernieren Insulin pulsatil und glucoseabhängig.
Extrapankreatische Insulinproduktion ist beim Menschen vernachlässigbar. Während Insulin-mRNA im Thymus, Gehirn und fetalen Geweben nachgewiesen wurde, und einige Studien eine lokale Synthese in Fett- oder Darmzellen unter bestimmten Bedingungen nahelegen, tragen diese Quellen nicht nennenswert zum zirkulierenden Insulinspiegel oder der Glukosehomöostase bei Erwachsenen bei.
Somit ist die Bauchspeicheldrüse die einzige physiologisch relevante Quelle für zirkulierendes Insulin. β-Zell-Versagen → Diabetes mellitus.

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