Amylase-Bluttest: Enzymspiegel & Verdauungsgesundheit verstehen

Amylase-Enzyme werden in der Bauchspeicheldrüse und in den Speicheldrüsen produziert und helfen bei der Verdauung und Verarbeitung von Kohlenhydraten. Wenn die Bauchspeicheldrüse erkrankt ist, wird Amylase in den Blutkreislauf freigesetzt. Wenn ein Patient Probleme im Verdauungstrakt hat oder eine Erkrankung der Bauchspeicheldrüse vorliegt, wird ein Arzt einen Bluttest anordnen, um den Amylasespiegel im Blut festzustellen. Die Überwachung der Amylase-Enzymspiegel liefert viele Informationen über den Fortschritt der Erkrankung und die Auswirkungen der Behandlung.

Dinge, die Sie benötigen

• UV/Vis-Spektrophotometer
• 15 große Reagenzgläser
• Reagenzglasständer
• 1 mg/ml Stärkelösung
• Deionisiertes Wasser
• KI/Iod-Reagenz
• Pipetten
• Pipette
• Tuch
• Küvetten
• Kariertes Papier
• Blutprobe
• Zentrifuge
• Stoppuhr

Anleitung

Herstellung einer Stärke-Standardkurve

1. Schalten Sie das Spektrophotometer ein und stellen Sie es auf eine Wellenlänge von 620 nm. Lassen Sie das Instrument mindestens 10 Minuten lang warm werden, damit die Reaktion während des Experiments stabil ist.

2. Stellen Sie sechs Reagenzgläser bereit, beschriften Sie sie mit 1-6 und legen Sie sie in einen Reagenzglasständer. Ordnen Sie die Stärkelösungen, deionisiertes Wasser und die KI/Iod-Lösung auf der Arbeitsplatte an.

3. Füllen Sie Reagenzglas 1 mit 3 ml deionisiertem Wasser mittels Pipette; dies dient als Leerprobe. Füllen Sie die Reagenzgläser 2-6 mit jeweils 3,0 ml, 2,9 ml, 2,7 ml, 2,4 ml und 2,1 ml deionisiertem Wasser. Geben Sie zu den Reagenzgläsern 2-6 in folgender Reihenfolge Stärkelösung hinzu: Reagenzglas 2 erhält 0 ml, Reagenzglas 3 erhält 0,1 ml, Reagenzglas 4 erhält 0,3 ml, Reagenzglas 5 erhält 0,6 ml und Reagenzglas 6 erhält 0,9 ml.

4. Geben Sie einen Tropfen KI/Iod-Lösung in jedes der sechs Reagenzgläser. Mischen Sie jedes Reagenzglas sorgfältig gründlich, bevor Sie die Absorption im Spektrophotometer aufzeichnen.

5. Füllen Sie die Küvette mit der Leerlösung, reinigen Sie die Außenseite der Küvette und legen Sie sie in das Leerloch des Spektrophotometer. Stellen Sie die Absorption auf Null ein. Alle anderen Lösungen ergeben einen positiven Absorptionswert.

6. Füllen Sie die Küvette der Reihe nach mit jeder der anderen fünf Lösungen. Wischen Sie die Außenseite der Küvette vor jeder Messung ab. Notieren Sie den Absorptionswert für jedes Reagenzglas. Spülen Sie die Küvette mindestens einmal mit der neuen Lösung aus, bevor Sie sie für den Test füllen.

7. Erstellen Sie ein Diagramm, das die Absorptionswerte gegen die Stärkekonzentration aufträgt. Dies ist die Standardkurve, die es Ihnen ermöglicht, die Konzentration einer Lösung mit einem bestimmten Absorptionswert zu bestimmen.

Bestimmung der Amylase-Konzentration

1. Reinigen Sie alle Reagenzgläser aus dem ersten Teil des Tests. Behalten Sie die Leerprobe für die spätere Verwendung bei.

2. Entnehmen Sie eine Blutprobe vom Patienten. Legen Sie die Probe in eine Zentrifuge und trennen Sie die roten Blutkörperchen vom Blutplasma.

3. Füllen Sie ein Reagenzglas mit 9 ml deionisiertem Wasser und 1 ml des Blutplasmas. Dies ist eine 1:10-Verdünnung des Plasmas. Mischen Sie das Reagenzglas gründlich und pipettieren Sie 1 ml der Lösung in ein zweites Reagenzglas. Beschriften Sie die beiden Reagenzgläser mit ihrem Inhalt.

4. Bereiten Sie sich auf einen zeitgesteuerten Test vor. Halten Sie eine Stoppuhr bereit und stellen Sie sieben Reagenzgläser mit Küvetten in den Reagenzglasständer. Sie nehmen alle zwei Minuten Messwerte, sobald der Test beginnt. Notieren Sie die genaue Zeit und den Absorptionswert für jeden der sieben Datenpunkte. Füllen Sie jedes der sieben Reagenzgläser mit 2 ml deionisiertem Wasser.

5. Geben Sie 9 ml der Stärkelösung in das Reagenzglas, das 1 ml der 1:10-Plasmaprobe enthält. Sobald Sie mit der Zugabe der Stärkelösung beginnen, starten Sie die Stoppuhr. Mischen Sie das Reagenzglas gut und pipettieren Sie 1 ml der Stärke/Plasma-Lösung in das erste der sieben Reagenzgläser. Notieren Sie die Zeit. Geben Sie einen Tropfen KI/Iod-Lösung in das Reagenzglas und mischen Sie es.

6. Übertragen Sie die Lösung in die Küvette, wischen Sie die Außenseite ab und notieren Sie die Absorption. Wiederholen Sie den Vorgang mit den verbleibenden sechs Reagenzgläser in zwei Minuten Intervallen. Am Ende des zeitgesteuerten Tests sollten Sie Messwerte für die tatsächliche Zeit und Absorption für die Zeitspannen von 0, 2, 4, 6, 8, 10 und 12 Minuten haben.

7. Verwenden Sie die Standardkurve, um die Stärkekonzentration für jeden der sieben Datenpunkte zu finden. Diese Punkte werden mit der Zeit abnehmen. Die Amylase verdaut die Stärke und verbraucht im Laufe der Zeit die gesamte verfügbare Stärke.

8. Tragen Sie die Datenpunkte des zeitgesteuerten Tests als Stärkekonzentration gegen Zeit auf. Die Steigung dieser Kurve gibt die Menge an Amylase in der Plasmaprobe an.