Genotypisierungs-Fehlerbehebung: Ein Leitfaden zur Optimierung von PCR-Experimenten

Einleitung

Genotypisierung wird verwendet, um genetische Unterschiede in Zellen durch die Verwendung der DNA des Probenstücks zu erforschen. Das im Labor verwendete Verfahren für die Genotypisierung ist PCR (Polymerase-Kettenreaktion). Die Verwendung von PCR erfordert die Verwendung von Primern. Manchmal müssen Wissenschaftler ihre eigenen Primer entwickeln, und dies an sich kann ein Problem verursachen. Darüber hinaus kann beim Durchführen eines PCR-Experiments Fehlerbehebung erforderlich werden, da die Ergebnisse möglicherweise nicht eindeutig sind. Es gibt viele verschiedene Möglichkeiten, wie Sie Ihr PCR-Experiment zur Erlangung genauer Ergebnisse beheben können.

Das benötigen Sie

• PCR-Kit
• Labor
• Handschuhe
• Pipetten
• Destilliertes Wasser

Anleitung

Genotypisierung beheben

1. Reinigen Sie alle Geräte, indem Sie Pipetten waschen und sterilisieren. Reinigen Sie zusätzlich Ihren Arbeitsbereich und verwenden Sie während Ihres Experiments ordentliche Laborhandschuhe.

2. Führen Sie einen Kontrolllauf ohne DNA durch. Dies wird als Ihr negativer Kontrolllauf angesehen.

3. Führen Sie einen positiven Kontrolllauf durch, falls verfügbar, für Ihr spezifisches Prüfstück. Dies wird eine bekannte DNA-Sequenz enthalten.

4. Bereiten Sie eine Reihe von Verdünnungen für Ihre DNA-Probe vor. Verdünnen Sie die Proben beispielsweise mit destilliertem Wasser. Eine Reihe von Verdünnungen zeigt, in welcher Konzentration die DNA-Probe amplifiziert wird.

5. Führen Sie für jeden Primer einen anderen PCR-Reaktionslauf durch, wenn Sie Probleme mit dem PCR-Produkt haben.

6. Ändern Sie die Temperatur, wenn keine Bänder amplifiziert werden.

7. Bestellen Sie neue Primer. Es ist möglich, dass etwas mit Ihrem Primer nicht stimmt und Sie einfach einen neuen benötigen.

8. Verwenden Sie einen anderen Primer, wenn Sie Probleme mit Ihrem Experiment haben und bereits einen neuen Primer bestellt haben. Recherchieren Sie Primärliteratur aus Studien, die dasselbe Prüfstück verwendet haben. Sehen Sie nach, wie sie ihre eigenen Primer entwickelt haben.

9. Reinigen Sie Ihre DNA durch Extraktion mit Natriumhydroxid, wenn alle anderen Fehlerbehebungsmethoden nicht funktioniert haben.