ELISA-Testverfahren: Ein umfassender Leitfaden für forensische Anwendungen

Einführung

ELISA ist das Akronym für ein forensisches Testverfahren namens Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. Es basiert auf der hohen Spezifität von Antikörpern für ein bestimmtes Antigen. Forscher verwenden chemisch modifizierte Antikörper, die an eine Probe-Well geheftet sind, und farbmarkierte Antigene, um das Vorhandensein und die Konzentration einer Vielzahl von Verbindungen, Medikamenten und Krankheitserregern zu bestimmen. Proben können aus Blut, Urin, Speichel und anderen Quellen entnommen werden.

Antikörper und Antigene

• ELISA verwendet normalerweise mehrere chemisch konstruierte Komponenten, um einen Test für ein bestimmtes Antigen zu erzeugen. Der erste Schritt bei der Herstellung eines ELISA-Tests ist die Entwicklung eines Antikörpers gegen die zu testende Verbindung. Der Antikörper wird dann gereinigt, modifiziert und auf einer Proben-Well verankert oder immobilisiert, die für den Test verwendet wird. Die zu testende Verbindung erhält ein fluoreszierendes Tag hinzugefügt.

  Die Industrie verwendet eine standardmäßige rechteckige Platte mit „Proben-Wells“ – wie kleine Schalen oder Reagenzgläser, die hineingefügt sind – um mehrere Experimente durchzuführen. Die Plattenmaße betragen 127,8 mm mal 85,5 mm und sind standardisiert, damit sie in Analyseinstrumente verschiedener Hersteller passen. Typische Platten haben zwischen sechs und 96 Proben-Wells, neuere Modelle haben Hunderte oder mehr.

Der Test

• Wenn eine Lösung, die die zu testende Verbindung und die farbmarkierte Verbindung enthält, in die Proben-Well gegeben wird, konkurrieren sie um die Bindung an den immobilisierten Antikörper. Je mehr native Verbindung, desto weniger farbmarkierte Verbindung kann an den immobilisierten Antikörper binden. Die Proben-Well wird von ungebundener Verbindung (nativer und farbiger) gespült. Die Proben-Well wird darauf ausgewertet, wie viel farbmarkierte Verbindung verbleibt, normalerweise mit einem Spektrophotometer.

Die Ergebnisse

• Weniger Farbe bedeutet eine höhere Konzentration der nativen Verbindung. Forscher richten eine „Standardkurve“ in einer Reihe von Wells ein, denen sie eine Reihe bekannter Konzentrationen der nativen Verbindung hinzufügen. Der ELISA-Test wird auf allen Wells durchgeführt, und der Farbunterschied über die Spanne der Standards hinweg ermöglicht es Forschern, unbekannte Konzentrationen in den von ihnen ausgewerteten Proben zu vergleichen und zu bestimmen.

  ELISA-Tests werden verwendet, um eine Vielzahl von Dingen zu testen, vom HIV-Virus bis hin zu Drogen, Giften und anderen Chemikalien. Sie haben den Vorteil des High-Throughputs für große Anzahlen von Proben und können bei der Verarbeitung vieler Proben sehr kosteneffektiv sein.

  Der ELISA-Test kann auch verwendet werden, um Antikörper in einer Testlösung zu erkennen. In diesem Fall wird das Antigen (Teil der Verbindung von Interesse, der an den Antikörper bindet) auf der Proben-Well immobilisiert, und die Antikörper für den Test haben ein Farb-Tag angebracht.