Wie eine Restriktionskarte Marke

In den frühen Tagen der Molekularbiologie, der Wissenschaftler häufig verwendete Restriktionskartierung , die Gene, die sie studierten, zu verstehen. In der modernen Forschungslabors wird Restriktionskartierung weitgehend veraltet , weil Sequenzierung zugänglich und kostengünstiger als in der Vergangenheit geworden. Es gibt jedoch Fälle, in denen eine Restriktionskarte kann ausreichend für einen Forscher ihre Untersuchungen durchzuführen. Das Gesamtkonzept für die Restriktionskartierung beinhaltet die Verwendung von Verdauungsenzymen , um eine Probe von DNA brechen körperlich. Wenn Sie die Produkte dieser Verdauung messen, können Sie " wieder zusammensetzen ", die Stücke und daraus die ursprüngliche Reihenfolge der DNA. Was Sie brauchen und
Restriction Enzyme DNA- Probe

Pufferlösung
Eis und heißen Wasserbad
Gel -Elektrophorese Ausrüstung
anzeigen Weitere Anweisungen
DNA Verdauung

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ein Restriktionsenzym , um Ihre DNA-Probe hinzufügen. Verwenden EcoR1 , eine häufig verwendete Enzym , zum Beispiel.
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zu einer Pufferlösung , die im Wesentlichen ist ein Ort für die Reaktion auftreten Fügen Sie diese Mischung .
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Erhöhen der Temperatur der Reaktion , wie in dem New England Biolabs Handbuch angegeben . Jedes Restriktionsenzym eine spezifische Reaktionstemperatur , bei der es funktioniert am besten. Zusätzlich hat jedes Enzym eine spezifische Nukleotidsequenz wird der gezielt . EcoRI scannt und schneiden die DNA an der Nukleotid-Sequenz CAATTC . Das genaue Reihenfolge der Nukleotide müssen für das Enzym binden und schneiden die DNA existieren. Bis zu diesem Zeitpunkt sollten alle Materialien auf Eis gehalten, um unerwünschte Aktivitäten zu verhindern.
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Nachdem die Reaktion stattfinden kann , wie im Handbuch angegeben , führen Sie die Mischung in einer Gel-Elektrophorese Maschine, um die DNA zu trennen Fragmente nach ihrer Größe . Die kleinsten Fragmente am weitesten über das Gel zu bewegen.
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Messen Sie den Abstand von jedem DNA-Fragment gereist. Diese fünf Schritte sollten mit mehreren verschiedenen Enzymen separat wiederholt werden.
Bau der Restriktionskarte
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Mit den aus dem Gel erhaltenen Daten sammeln alle Informationen, die Sie gefunden haben Verwendung der verschiedenen Restriktionsenzymen .
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Leiten Sie die Reihenfolge der Restriktionsstellen durch den Vergleich der von jedem Enzym produziert verschiedene Fragmentlängen . Zum Beispiel, wenn Enzym # 1 erzeugt zwei Fragmente von gleicher Länge und Enzym # 2 erzeugt drei Fragmente gleicher Länge , können Sie , dass Enzym Nr. 1 Kürzungen der Hälfte der DNA schließen und Enzym Nr. 2 schneidet die DNA in Drittel .

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mit den Schlussfolgerungen in Schritt 2 erstellt , montieren Sie die Reihenfolge der Restriktionsstellen für die DNA.