GFP-Transfektionsprotokoll: Ein umfassender Leitfaden für Forscher

Einleitung

Die Verwendung des Grünen Fluoreszierenden Proteins revolutionierte die molekulare und zelluläre Biologie; es erlaubte Forschern, Zellen und Proteine auf Arten zu visualisieren, die zuvor nie möglich waren. Seine Auswirkungen auf die wissenschaftliche Forschung waren so tiefgreifend, dass Osamu Shimomura 2008 den Nobelpreis für Chemie für seine Entdeckung und Isolierung von GFP aus fluoreszierenden Quallen erhielt.

Definitionen

• Ein Gen ist die Sequenz von Desoxyribonukleinsäure in Zellen, die für die Produktion eines bestimmten Proteins verantwortlich ist. Ein Plasmid ist ein separates Stück DNA, das ein interessantes Gen wie GFP enthält. Transfektion ist die Methode, ein Plasmid in Zellen einzuführen.

Methoden

• Transfektion beinhaltet typischerweise das Mischen eines DNA-Plasmids, das ein Gen wie GFP enthält, mit Lipiden oder Salzen. Zellen werden dieser Lösung ausgesetzt, die Löcher in der Zellmembran erzeugt, sodass das Plasmid in die Zelle gelangt, wo das Gen als Protein exprimiert werden kann. Kommerzielle Transfektions-Kits sind erhältlich, oder die Reagenzien können in einem Labor hergestellt werden. Die Wahl der Transfektionsmethode hängt von der Art der verwendeten Zellen und Plasmide ab. Das GFP wird mit Geräten visualisiert und überwacht, die Fluoreszenz erkennen.

Anwendungen

• GFP wird normalerweise an ein Protein von Interesse für die Transfektion angehängt. Das Nobelkomitee hob die Verfolgung von „Nervenzellschäden während der Alzheimer-Krankheit“ und „wie insulinproduzierende Betazellen im Pankreas eines wachsenden Embryos entstehen“ als Beispiele hervor.