Protokoll zur Transfektion von GFP

Der Einsatz von Green Fluorescent Protein revolutioniert Molekular-und Zellbiologie , es Forschern erlaubt, Zellen und Proteinen in einer Weise, die nie zuvor möglich zu visualisieren. Seine Auswirkungen auf die wissenschaftliche Forschung war so tief, dass im Jahr 2008 Osamu Shimomura gewann den Nobelpreis für Chemie für seine Entdeckung und Isolierung von GFP aus fluoreszierenden Quallen. Definitionen

Gen die Sequenz von Desoxyribonukleinsäure in Zellen, die für die Produktion eines bestimmten Proteins verantwortlich ist. Ein Plasmid ist ein separates Stück von DNA, die ein Gen von Interesse , wie GFP enthält . Transfektion ist das Verfahren zum Einführen eines Plasmids in Zellen.
Methoden

Transfektion typischerweise das Vermischen eines DNA- Plasmid, das ein Gen wie GFP mit Lipiden oder Salzen . Zellen werden zu dieser Lösung, die Löcher in der Zellmembran erzeugt , so dass das Plasmid in der Zelle, wo das Gen als Protein exprimiert werden ausgesetzt . Handels Transfektion Kits zur Verfügung , oder die Reagenzien in einem Labor durchgeführt werden. Die Wahl der Methode hängt von der Transfektion der Art der Zellen und Plasmide verwendet werden. Die GFP wird visualisiert und mit Geräten, die Fluoreszenz detektiert überwacht.
Verwendet

GFP ist in der Regel ein Protein von Interesse für die Transfektion angebracht. Das Nobelkomitee hob die Verfolgung von " Schädigung von Nervenzellen während der Alzheimer-Krankheit " und als Beispiele , "wie Insulin-produzierenden Beta -Zellen in der Bauchspeicheldrüse von einer wachsenden Embryo geschaffen " .