Agar-Verdünnungstest: Antimikrobielle Empfindlichkeit & MKW

Bei Agar-Verdünnungsmethoden werden Lösungen mit einer bestimmten Anzahl von Mikroben auf einen nährstoffreichen Agarplatten platziert und mit variierten Konzentrationen eines antimikrobiellen Wirkstoffs geimpft. Die Platte wird etwa 24 Stunden lang inkubiert und die Trübung, Wachstumsablagerung oder die Anzahl der vorhandenen mikrobiellen Kolonien wird bewertet. Mikroben werden als empfindlich, intermediär oder resistent gegenüber antimikrobieller Aktivität eingestuft.

Minimale Hemmstoffkonzentration (MKW)

• Das Ziel der Agar-Verdünnung ist es, die kleinste Konzentration von antimikrobiellen Wirkstoffen wie Antibiotika, Desinfektionsmitteln oder Konservierungsstoffen zu bestimmen, die erforderlich ist, um Mikrobenwachstum zu zerstören oder zu verhindern, was als minimale Hemmstoffkonzentration (MKW) bezeichnet wird. Die MKW wird in Milligramm pro Liter gemessen, und die erhaltenen Werte werden verwendet, um die Wirksamkeit von antimikrobiellen Wirkstoffen zu messen – zum Beispiel die Überwachung von Antibiotikaresistenzen.

Koloniesuspensionsmethode

• Diese Methode beinhaltet das Übertragen einer kleinen Probe ausgewählter mikrobieller Kolonien in ein Glasröhrchen mit Kochsalzlösung. Das Röhrchen wird kräftig geschüttelt und zum Stehen gelassen. Die Trübung wird als Zeichen für Mikrobenwachstum gemessen, indem der Röhrcheninhalt mit einem Laborstandard wie dem McFarland-Standard verglichen wird. Der Vergleich ist am besten vor einem weißen Hintergrund in einem Raum mit angemessener Beleuchtung durchzuführen. Die Koloniesuspensionsmethode dauert etwa fünf Minuten pro Probe.

Wachstumsmethode

• Bei der Wachstumsmethode werden ausgewählte mikrobielle Kolonien in ein Röhrchen mit einem nährstoffreichen Medium platziert. Das Röhrchen wird dann bei 35 bis 37 Grad Celsius (95 bis 99 Grad Fahrenheit) inkubiert und gleichzeitig geschüttelt. Dieser Prozess dauert je nach Wachstumsrate des Mikrobs etwa zwei bis sechs Stunden. Nach Abschluss wird die Trübung mit demselben Standard wie bei der Koloniesuspensionsmethode bewertet.

Wachstumsmethode mit Übernachtkulturen

• Mikrobielle Kolonien in nährstoffreichen Medien werden über Nacht inkubiert. Nach der Inkubation wird die optische Dichte jeder Probe bei 600 nm gemessen. Die Probe wird dann mit Nährmedium im Verhältnis 1:100 verdünnt und in fünf weitere Verdünnungen im Verhältnis 1:10 getrennt. Vier der neuen Verdünnungen werden auf eine Agarplatte aufgebracht und über Nacht inkubiert. Am folgenden Tag wird die Anzahl der gebildeten Kolonien gezählt und koloniebildene Einheiten pro Milliliter berechnet.