Bakterienisolationstechniken: Die Streifenplatten-Methode erklärt

Obwohl sie mit bloßem Auge nicht sichtbar sind, sind Bakterien überall. Sie existieren in Lebensmitteln, Boden, Wasser, Oberflächen in unseren Häusern und in und auf unseren Körpern. Bakterien existieren im Allgemeinen in gemischten Populationen. Die Isolierung eines bestimmten Bakteriums von anderen Bakterienarten in einer gegebenen Probe ermöglicht es Mikrobiologen, seine Struktur und Funktion zu untersuchen, Merkmale, die für seine Identifizierung verwendet werden. Mikrobiologen isolieren Bakterien häufig mit einer von mehreren Streifenplatten-Techniken.

Werkzeuge

Eine Inokulationsschleife wird verwendet, um Mikroorganismen zu übertragen. Sie besteht aus einem Nickel-Chrom- oder PlatinDraht mit einer kleinen, runden Schlaufe an einem Ende. Das andere Ende ist gerade und gleitet in einen Griff. Es sind auch Kunststoff-Einweginokulationsschleifen erhältlich. Bakterien können nur isoliert werden, wenn sie wachsen. Mikrobiologen züchten Bakterien für die Streifenplatten-Isolierung in flachen, runden Petrischalen, die mit einem festen Medium gefüllt sind, genannt Agar. Agar ahmt die Umgebung nach, in der die Bakterien natürlich wachsen. Die mediumgefüllten Schalen sind steril und mit Deckeln versehen, um das Wachstum unerwünschter Organismen zu verhindern. Während der Streifenplatten-Isolierung wird die Inokulationsschleife wiederholt in der Flamme eines Bunsen-Brenners sterilisiert.

Prinzip

Die Streifenplatten-Technik ist die beliebteste Methode zur Isolierung bestimmter Bakterien aus einer Probe, die eine Mischung von Mikroorganismen enthält. Die Technik verdünnt im Wesentlichen die Anzahl der Organismen und reduziert ihre Dichte. Sie ermöglicht es Mikrobiologen, einzelne Bakterienkolonien zu unterscheiden und zu isolieren. Eine Kolonie ist ein sichtbarer Cluster von Bakterien. Alle Bakterien in einer einzelnen Kolonie stammen von derselben bakteriellen Zelle ab. Folglich sind einzelne Kolonien „reine“ Kolonien. Die reine Kolonie wird auf eine andere Platte übertragen, um eine reine Kultur zu erzeugen, die aus einer Bakterienart besteht.

Vorgehensweise

Wenn ordnungsgemäß durchgeführt, verdünnt die Streifenplatten-Isolierung eine Probe und ermöglicht es einzelnen bakteriellen Zellen, sich zu isolierten Kolonien zu entwickeln. Ein Mikrobiologe beginnt damit, die Inokulationsschleife in einer Flamme zu sterilisieren. Er kühlt die Schleife ab, indem er sie auf das Agar berührt, taucht dann die Schleife in die Probe und verteilt sie hin und her, um einen Bereich der Platte zu bedecken. Er sterilisiert die Schleife, kühlt sie ab und impft einen zweiten, angrenzenden Bereich der Platte, indem er die Schleife mehrmals durch den ersten Bereich zieht und den zweiten Bereich mit einer Zickzackbewegung bedeckt. Dadurch wird eine kleine Anzahl von Bakterien aus dem ersten Bereich aufgenommen und in den zweiten Bereich übertragen. Die Anzahl der Male, die dieses grundlegende Verfahren wiederholt wird, hängt von der verwendeten Streifenplatten-Methode ab. Unabhängig von der Methode wird die ursprüngliche Probe nur zur Impfung des ersten Bereichs der Platte verwendet.

Methoden

Streifenplatten-Methoden variieren je nach Anzahl der Agar-Bereiche, die gestreift werden. Die T-Streifenmethode verwendet drei Bereiche: die obere Hälfte und zwei gleich große untere Bereiche. Das ursprüngliche Inokulum wird in die obere Hälfte der Platte platziert. Bakterien werden aus dem oberen Bereich in einen der unteren Bereiche gezogen und dann von diesem unteren Bereich in den anderen. Bei der Quadrantmethode werden vier gleich große Bereiche gestreift. Die kontinuierliche Streifenmethode umfasst typischerweise das Impfen der oberen Hälfte der Platte, das Drehen um 180 Grad und das Impfen der anderen Hälfte der Platte, ohne die Schleife zu sterilisieren oder Bakterien aus dem vorherigen Bereich zu ziehen.