Probenvorbereitung für Gel-Elektrophorese: Ein umfassender Leitfaden

Einleitung

Die elektrophoretische Trennung ist eine der am weitesten verbreiteten Methoden in der Biochemie. Obwohl Elektrophorese frei in einer Lösung durchgeführt werden kann, ist es bequemer, eine Art Trägermedium zu verwenden. Die zwei am häufigsten verwendeten Trägermedien sind Papier und Gel. Gel-Elektrophorese ist eine Technik, die häufig mit Proteinen und Nukleinsäuren verwendet wird. Die DNA-Analyse ist ein signifikanter Fall, bei dem Gel-Elektrophorese durchgeführt wird. DNA sind Polyelektrolyte, die allein anhand der Größe getrennt werden können.

Benötigte Utensilien

• Probenlösung
• Standardlösung
• Pufferlösung
• Gel-Medium
• Tracking-Farbstoff

Anleitung

Schritt 1

Bereiten Sie die Probenlösung und die Standardlösung mit bekanntem Molekulargewicht vor.

Schritt 2

Bereiten Sie eine Pufferlösung mit dem Ihrem Proben am nächsten liegenden pH-Wert vor.

Schritt 3

Bereiten Sie das Trägermedium (Gel) vor; gebräuchliche Gel-bildende Materialien sind Polyacrylamid, ein wasserlösliches, vernetztes Polymer, Agarose und Polysaccharid.

Schritt 4

Platzieren Sie das Gel zwischen den Elektrodenfächern, wobei die Unterseite je nachdem, ob Anionen oder Kationen getrennt werden, als Anode oder Kathode ausgewählt wird.

Schritt 5

Tropfen Sie mit einer Pipette vorsichtig eine kleine Menge der Lösung jeder Probe in eine der mehreren vorgefertigten Kerben auf dem Gel.

Schritt 6

Fügen Sie der Probe Glycerin und einen wasserlöslichen Tracking-Farbstoff hinzu. Das Glycerin macht die Probenlösung dicht, sodass sie sich nicht mit der Pufferlösung in der oberen Elektrodenkammer vermischt.