Western-Blot-Analyse: Ein umfassender Leitfaden zur Proteinaufdeckung

Einleitung

Ob natürlich oder künstlich exprimiert, Proteine sind fast nie allein zu finden. Western-Blot-Analyse oder Immunoblotting wird verwendet, um ein interessantes Protein aus einer Mischung zu isolieren und zu analysieren.

Verfahren

Western Blotting besteht aus drei Hauptschritten: Elektrophorese, bei der die Proteinmischung basierend auf Größe und Ladung in lokalisierte Banden getrennt wird; Transfer, bei dem die Proteine von einem Polymergel auf einen Papiersubstrat übertragen werden; und Entwicklung, bei der das interessierende Proteinband markiert und analysiert wird.

Anwendungen in der Forschung

Western Blotting wird in der biomedizinischen Forschung umfassend verwendet. Da Proteine wichtige Indikatoren für Zellfunktion sind, kann ein Western Blot Informationen über zellulären Stoffwechsel und Abstammung liefern. Rekombinante Proteinexpression kann ebenfalls mit einem Western Blot verifiziert und untersucht werden.

Anwendungen in der Medizin

Western Blots sind arbeitsintensiv und zeitaufwendig, und ihre klinischen Anwendungen sind entsprechend begrenzt. Sie sind jedoch wichtig bei der Diagnose einiger Krankheiten, einschließlich Borreliose, HIV und Prionerkrankungen wie der Creutzfeldt-Jakob-Krankheit.

Geschichte

Die erste Demonstration der Proteintrennung in einem Polymergel wurde 1977 veröffentlicht. Die schnelle und effiziente Übertragung des Proteins auf Papier durch Elektroblotting – entscheidend für die Akzeptanz der Methode – wurde 1979 demonstriert.

Benennung

Der Begriff „Western Blot“ ist Teil einer etwas ausgeklügelten Wortspielerei von Wissenschaftlern. Das analoge Verfahren zur Charakterisierung von DNA heißt Southern Blot nach seinem Erfinder George Southern. Die RNA-Version ist allgemein als Northern Blot bekannt, und vielleicht unvermeidlich ist Protein-Immunoblotting Western Blotting.