Der Edman-Abbau – ein bekannter Prozess zur Identifizierung der N-terminalen Aminosäure eines Proteins – erfordert die Spaltung der Aminosäure, gefolgt von der Identifizierung mittels Chromatographie oder Elektrophorese. Automatisierte Prozesse beschleunigen die N-Terminal-Sequenzierung.
Die Fakten
- Proteine, die innerhalb einzelner Zellen produziert werden, wirken als Hormone, Enzyme und andere wichtige Regulatoren. Eine genetische Mutation, die zu einem abnormen Protein führt, könnte ernsthafte gesundheitliche Folgen haben.
Prozess
- Die N-terminale Aminosäure wird durch Behandlung mit einem von mehreren Reagenzien gespalten und dann hydrolysiert, um eine separate Aminosäure zu bilden. Dünnschichtchromatographie, HPLC oder Elektrophorese bestimmt die Größe der Aminosäure und vergleicht sie mit einem bekannten Größestandard. Das neue N-terminale Ende des verbleibenden Proteins kann ähnlich gespalten werden, um es zu identifizieren.
Automatisierung
- Applied Biosystems führte die Entwicklung der Automatisierung des Edman-Abbaus an, bei der ein gereinigtes Protein an eine Membran gebunden und mit Phenylisothiocyanat behandelt wird. Die freie Aminosäure wird automatisch in ein HPLC-System zur Identifizierung eingespritzt.
Komplikationen
- Proteine müssen relativ rein und frei von Verunreinigungen bleiben, um die N-terminale Aminosäure genau zu bestimmen. Die Grenzen des Edman-Abbaus erfordern große Proteinmoleküle, die in kleine Peptidketten fragmentiert werden, die nicht länger als 50 Aminosäuren sind.
