Paraffin-Einbettung: Ein umfassendes Protokoll für biologische Proben

Wissenschaftler müssen biologische Proben normalerweise verfestigen, um sie in Abschnitte zu schneiden. Dies erleichtert es Wissenschaftlern, Farbstoffe, Antikörper und Sonden an die biologische Probe anzufügen. Es reduziert auch die Überlagerung verschiedener Zellschichten. Wissenschaftler verwenden Paraffinwachs als harte Matrix für den Schnitt, da Paraffin sich nicht mit Wasser vermischt. Paraffin ist eine Art Kohlenwasserstoff. Die biologischen Proben enthalten Wasser, daher müssen die Wissenschaftler die Proben mit zunehmend konzentrierten Ethanolbädern dehydrieren.

Xylol

Wissenschaftler entfernen das Ethanol mit Xylol. Dann verwenden sie flüssiges Paraffinwachs, um das Xylol zu entfernen. Für die Lichtmikroskopie sind die Paraffinschnitte in der Regel fünf Mikrometer dick. Paraffinwachs ist nicht hart genug für dünnere Scheiben. Wissenschaftler rehydrieren das Gewebe, indem sie zuerst Xylol und dann Ethanol verwenden. Dann spülen sie die biologische Probe mit destilliertem Wasser, um Kontamination zu vermeiden.

Fixierung

Paraffin-embettete Gewebe werden normalerweise mit neutral gepufferter Formalin fixiert, der kommerziellen Version von Formaldehyd. Dies umfasst Paraformaldehyd und Methanol, was verhindert, dass Formaldehyd zu Ameisensäure umgewandelt wird. Dünn geschnittene Gewebe benötigen für eine optimale Histologie, das Studium der mikroskopischen Anatomie, 48 Stunden Fixierung bei Raumtemperatur. Andernfalls verhärtet das Gewebe und wird spröde. Vor der Verarbeitung wird das Gewebe normalerweise bei einer Temperatur von 4 Grad Celsius in 70-prozentigem Ethanol gelagert.

Paraffin-Prozessoren

Wissenschaftler verwenden oft Paraffin-Prozessoren, um das Gewebe durch Bäder zu schicken, die das Material allmählich dehydrieren, bevor heißes Paraffin durch das Gewebe eindringen kann. Wissenschaftler lassen den Prozessor über Nacht laufen. Der Prozessor erhitzt das Gewebe nur für eine bestimmte Zeit, die vom Gewebe abhängt, damit es nicht hart und spröde wird. Der Prozessor verwendet ein Vakuum, das das Eindringen von Paraffin beschleunigt und Luftblasen entfernt. Nach der Verarbeitung werden die Gewebe bei Raumtemperatur in Kassetten gelagert.

Wachs schmelzen

Das Paraffin schmilzt eine Stunde vor dem Hinzufügen des Gewebes. Die gesamte Kassette wird für 15 Minuten in ein 65 Grad Celsius heißes Paraffinbad gelegt. Ein kalter Aluminium-Wärmespeicher kühlt das Paraffinwachs für 20 Minuten ab. Wenn das Wachs reißt oder die Gewebe nicht richtig ausgerichtet sind, schmilzt der Wissenschaftler das Paraffin und wiederholt den Prozess.

Schneiden

Beim Schneiden der Gewebe bringt der Wissenschaftler das Wasserbad auf 35 bis 37 Grad Celsius. Das Wasser ist frisch und deionisiert. Die Blöcke werden für 10 Minuten mit der Vorderseite nach unten auf einen Eisblock oder Wärmespeicher gelegt. Eine Klinge schneidet den Block in Abschnitte. Zwei Probleme, die auftreten können, sind schlechtes Bandbild und Fragmentieren von Proben. Wenn die Proben fragmentieren, ist das Wasser zu heiß. Wenn der Block nicht gut bandt, sollten Sie ihn wieder auf den Eisblock legen und das Wachs festigen, bevor Sie von vorne beginnen.