Biotinylierung ist der Prozess der Verknüpfung von Biotin oder Vitamin H mit einem Protein oder anderen Molekülen. Dieses wissenschaftliche Verfahren wird hauptsächlich in der Biotechnologie und molekularbiologischen Forschung mit DNA, Proteinen und Antigenen verwendet, die Moleküle sind, die das Immunsystem des Körpers als Eindringlinge erkennt. Biotinylierungsprotokolle umfassen die Biotinylierung von Antikörpern und Peptiden sowie die Oberflächenbiotinylierung von Zellen.
Biotinylierung von Antikörpern
- Um Biotin an Antikörperproteine zu binden, die produziert werden, wenn ein Antigen in den Körper gelangt, verwenden Techniker Natriumbicarbonat (NaHC03) bei pH 9; Dimethylsulfoxid (DMSO); NHS-Biotin und eine Salzsubstanz namens PBS. Proben werden mit Natriumbicarbonat gemischt, das später zu NHS-Biotin in DMSO hinzugefügt wird. Die Lösung wird dann zu den analysierten Antikörpern hinzugefügt und auf einem Gerät namens Rotator für vier Stunden bei Raumtemperatur oder über Nacht bei 39,2 Grad Fahrenheit inkubiert. Schließlich wird die Lösung mit PBS verdünnt.
Oberflächenbiotinylierung von Zellen
- Beim Protokoll zur Oberflächenbiotinylierung verwenden Techniker Zellkultur, phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) bei pH 7,4 und Sulfosuccinimidyl-2-(Biotinamido)ethyl-1,3-dithiopropionat-Pufferlösung zur Ausgleichung der Säure, die Aminogruppen und TrisCl enthält, gemäß Current Protocols in Protein Science. Die Zellen werden mit dem Biotin und der Pufferlösung gemischt, abgemixt und zentrifugiert. Feststoffe und spezifische Proteine werden später auf einer Gel-Elektrophorese-Platte analysiert.
Biotinylierung von Peptiden
- Um die Biotinylierung von Peptiden durchzuführen, wird das Reagenz NHS-SS Biotin verwendet, laut Philip Shepherd in „Monoclonal Antibodies: A Practical Approach.“ Peptide sind kurze Fragmente von Aminosäuren, den Molekülen, die Proteine und DNA bilden. In diesem Protokoll wird die kommerzielle Lösung NHS-SS Biotin in Wasser gelöst. Dann wird die Peptidprobe zusammen mit Natriumbicarbonat zum Ausgleich der Säure oder des pH-Wertes hinzugefügt. Die Lösung wird dann zwei Stunden auf Eis inkubiert. Techniker können die Probe mit oder ohne Biotinmoleküle beobachten.
