Tetramethylrhodamin ethyl (TMRE) ist ein „langsames, lipophiles, kationisches Fluoreszenz-Umverteilungsfarbstoff“, der im MitoPT ™ TMRE/TMRM Mitochondrial Membrane Potential Assessment Kit verwendet wird, hergestellt von ImmunoChemistry Technologies, LLC. Der Prozess hilft, ein transmembranes elektrisches Potentialgefälle in Zellen zu visualisieren.
Vorbereitung des Tests
- Das Protokoll ist einfach zu befolgen und dauert etwa 20 Minuten zur Verarbeitung bei 37 Grad Celsius. Die lebenden Zellen, die für den Test verwendet werden, benötigen zwischen mehreren Stunden und mehreren Tagen zur Vorbereitung. Die Kontrollzellen können mehrere Stunden zur Vorbereitung benötigen, da sie zur Induktion von Apoptose angeregt werden müssen.
Protokoll Teil 1
- Kultivieren Sie Zellen auf einer für die Induktion von Apoptose oder oxidativem Stress optimalen Dichte, gemäß Ihrem spezifischen Induktionsprotokoll, jedoch nicht mehr als 10^6 Zellen/mL.
Protokoll Teil 2
- Kultivieren Sie zur gleichen Zeit eine nicht induzierte negative Kontrollzellpopulation (bei derselben Dichte wie die induzierte Population).
Protokoll Teil 3
- Induzieren Sie Apoptose oder depolarisieren Sie die Mitochondrien absichtlich gemäß Ihrem gewünschten Protokoll.
Protokoll Teil 4
- Bereiten Sie 1X Assay/Wash Buffer vor.
Protokoll Teile 5 bis 8
- Bereiten Sie die 1 mM oder 0,2 mM MitoPT™ TMRE/TMRM-Lagerlösung vor. Für Protokoll Teil 6 bereiten Sie eine 1:100-Verdünnung der 1 mM oder eine 1:20-Verdünnung der 0,2 mM MitoPT™ TMRE/TMRM-Lösung zur Zugabe zu Zellkulturproben vor. Für Protokoll Teil 7 färben Sie Zellen mit einer Endkonzentration von 20–200 nM MitoPT™ TMRE/TMRM-Lösung. Für Protokoll Teil 8 analysieren Sie die Daten.
