Flow-Zytometrie-Datenanalyse: Ein umfassender Leitfaden

Die Durchflusszytometrie ist der Prozess des Analysierens und Zählens von Zellen und Partikeln anhand der Theorie der Lichtstreuung und Lichtanregung. Die Zellen werden nacheinander durch eine Scheide gezwungen und passieren den Strahl eines Lasers. Der Laser regt die Chemikalien innerhalb der Zellen an. Verschiedene Zelltypen emittieren unterschiedliche Arten von Licht. Optische Detektoren oder Linsen nehmen das Licht auf und messen es, indem sie es in einen Datenstrom übertragen. Durch die Datenanalyse können Techniker die Verteilung von Zellen ermitteln und Ärzten und Forschern bei Behandlungsentscheidungen helfen.

Anleitung

1. Legen Sie die Parameter des Zytometers fest. Jedes Zytometer verfügt über eine Computerkomponente, das das von den Zellen emittierte Licht empfängt und die Menge und Qualität des Lichts in zugängliche Daten umwandelt. Da es verschiedene Zelltypen gibt, entsteht eine große Menge an Daten. Die Festlegung der benötigten Daten verlangsamt den Informationsfluss auf ein handhabbares Maß. Zu den Optionen gehören das Einstellen der Spannung, das Anpassen der Laserpuls-Parameter oder das Setzen der Lichtschwelle.

2. Wählen Sie die Filter für jede optische Linse aus. Filter, die bestimmte Bandbreiten für jede Linse ausschneiden, ermöglichen es dem Zytometer, die unterschiedlichen chemischen Eigenschaften jeder Zelle zu erkennen. Dadurch kann das Zytometer auch erkennen, ob das Licht direkt nach vorne reflektiert wird (Vorwärtsstreuung, FS) oder ob es in einem 90-Grad-Winkel reflektiert wird (Seitwärtsstreuung, SS).

3. Wählen Sie die logaritmische oder lineare Erfassung. Lineare Erfassung sind die Rohdaten, die vom Zytometer erzeugt werden. Sie zeigen den Zelltyp oder die chemische Zusammensetzung der Zellen, die durch den Laserstrahl fließen. Die Logarithmusfunktion geht einen Schritt weiter. Sie verwendet eine mathematische Funktion, um zusätzliche Zellen zu projizieren, die möglicherweise nicht vom Zytometer erkannt werden. Zum Beispiel können Zellen eine chemische Verbindung aufweisen, die ein Nebenprodukt einer Virusinfektion ist. Obwohl das Virus möglicherweise zu klein ist, um durch den Lichtstrom erkannt zu werden, wird die Logarithmusfunktion das Vorhandensein des Virus anhand der chemischen Zusammensetzung der Zellen hypothesieren.

4. Wählen Sie ein- oder zweiparametrische Histogramme. Dies sind Graphentypen, die verwendet werden, um die vom Zytometer gesammelten Daten anzuzeigen. Ein einparametrisches Histogramm ist geeignet, wenn alle Daten auf einer „positiven“ Achse aufgetragen werden, was bedeutet, dass alles Licht reflektiert und gemessen wird. Eine einfache Vorstellung davon ist ein Balkendiagramm mit Ebenen auf der linken und unteren Seite des Rahmens. Die Informationen werden zwischen diesen beiden Parametern aufgetragen. Für Zellen, die unterschiedliche Lichtmengen absorbieren, wird jedoch ein zweiparametrisches Histogramm verwendet. Dadurch können die Daten auf einer positiven und negativen Achse dargestellt werden.