pcDNA3.1-Plasmidkarte: Schlüsselelemente für die Säugetier-Expression

Die pcDNA3.1-Plasmidfamilie (Invitrogen/Thermo Fisher) ist ein weit verbreiteter Säugetier-Expressionsvektor. Schlüsselelemente umfassen:

Kernmerkmale

• CMV-Promotor: Starker konstitutiver Promotor für hohe Expression in Säugetierzellen (nicht T7 – T7 ist für In-vitro-Transkription).
• Multiple Klonstelle (MCS): Flankiert von Restriktionsstellen für gerichtete Klonierung.
• BGH-Polyadenylierungssignal: Bovines Wachstumshormon polyA für mRNA-Stabilität und Kernexport.
• SV40-Origin: Für episomale Replikation in Zellen, die SV40-großes T-Antigen exprimieren (z. B. HEK293T).
• f1-Origin: Einzelstrang-DNA-Produktion für Sequenzierung/Mutagenese.
• Neomycin-/Kanamycinresistenz (NeoR/KanR): G418-Selektion in Säugetierzellen; Kanamycin für bakterielle Selektion.
• Ampicillinresistenz (AmpR): Bakterielle Selektion (β-Laktamase).
• ColE1-Origin: Hochkopien-Replikation in E. coli.
• T7-Promotor: Vor der MCS für In-vitro-Transkriptionsanwendungen (IVT).

Versionsunterschiede

• pcDNA3.1(+): CMV → MCS → BGH polyA in Vorwärtsorientierung.
• pcDNA3.1(-): Rückwärtsorientierung (nützlich für bestimmte Klonierungsstrategien).
• pcDNA3.1/V5-His, /myc-His, /HA: Enthalten Epitop-Tags und His6 für Detektion/Reinigung.
• pcDNA3.1/CT-GFP, /NT-GFP: GFP-Fusionsvarianten.

Anwendungen

Transiente/stabile Transfektion, stabile Zelllinienerzeugung, Protein-Expression, funktionale Studien, Antikörperproduktion. Hohe Kopienzahl in E. coli erleichtert Plasmidpräparation.

Hinweis: Die ursprüngliche Beschreibung listete fälschlicherweise T7 als Säugetierpromotor auf. CMV ist der Säugetierpromotor; T7 ist für IVT.