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Blockierpuffer werden verwendet, um beschichtete Proteine in Immunchemie-Assays zu stabilisieren und, laut Immunochemistry Technologies, reduzieren sie Rauschen in den Ergebnissen einzelner Assays, erhöhen die Empfindlichkeit des Assays, erhöhen die Effizienz und Haltbarkeit der beschichteten Platten und verbessern die Reproduzierbarkeit. Blockierpuffer inhibieren nicht-spezifische Bindung, nachdem die Proteine und Antikörper gebunden und während eines ELISA (ein enzymgebundener Immunabsorptionsassay) auf die beschichtete Assay-Platte absorbiert wurden. Da ELISA auf unterschiedliche Weise aufgebaut werden können, gibt es mehrere Auswahlmöglichkeiten von Blockierpuffern, um die individuellen Anforderungen eines Technikers zu erfüllen.
Wählen Sie Ihren Blockierpuffer je nach Art des ELISA, den Sie durchführen werden. Auswahlmöglichkeiten des Puffers umfassen: allgemeine Blocker (mammalisches Proteinschleißgerüst) für Sandwich- und Antigen-down-ELISAs; BB2 Neptun-Blockierung (nicht-mammalisches Proteinschleißgerüst) für menschliche und mammalische Spezies-ELISAs; BB3 Synblocks (kleine, synthetische molekulare Gerüste) für hochfeste Blockierungs-ELISAs; und BB4 Phosphat-frei (kleine, synthetische, phosphatfreie molekulare Gerüste) für hochspezifische, nicht-spezifische, enzymmarkierte Konjugat-Bindungs-ELISAs. Der BB4-Puffer-Blocker ist besonders nützlich in Assays, die alkalische Phosphatase, chemisch behandelte oder Glasreaktionsplatten und in der Mikrofluidik verwenden, wie von Immunochemistry Technologies berichtet, einem Unternehmen, das alle relevanten Assay-Ausrüstungen liefert.
Beschichten Sie die Assay-Platte mit Ihrem Antigen (Protein) oder dem Antikörper, indem Sie die Lösung über die Platten gießen.
Aspirieren Sie (entfernen) die Beschichtungslösung, indem Sie die Platte kippen, sodass der Überschuss in einen separaten Behälter abgegossen wird.
Pipettieren Sie 300 bis 400 Mikroliter des Blockierpuffers in jedes Well der Assay-Platte mit einer Pipette.
Inkubieren Sie die Lösungen für etwa drei Stunden oder über Nacht bei Umgebungstemperatur (4 Grad Celsius). Laut der Cell Technology Company wird der richtige Blockierpuffer Ihre Reagenzien schonen, was wertvoll sein kann, weil sie kostspielig und knapp sein können.
Waschen Sie das überschüssige Protein ab, um überschüssige Mengen zu entfernen, da dies die Erkennung Ihres Zielantigens reduzieren kann, wie von Pierce Net berichtet.
An diesem Punkt ist die Reaktion abgeschlossen und Sie sollten eine fertige Platte haben, die die richtige Menge an gebundenem Antikörper zum Antigen enthält, was konsistente Ergebnisse liefert und Platten-zu-Platten-Variationen in großen, vergleichenden Assays reduziert.
Im Falle eines Mikroarrays verwenden Sie eine fortschrittliche Blockierungslösung wie Array It's Block It Buffer, die speziell entwickelt wurde, um alle reaktiven Gruppen zu inaktivieren, die nach einem „Print“ von Substraten auf Schildern mit Super-Epoxy, Super-Amin und Super-Aldehyd verbleiben, während gleichzeitig die Schärfe des resultierenden Signals beibehalten, Fluoreszenz verhindert und Rauschreduzierung erleichtert wird. Dieses Reagenz hat bei richtiger Lagerung eine Haltbarkeit von einem Jahr, ist extrem rein und wird als gebrauchsfertiges Konzentrat geliefert.
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