Proteinausdruck messen: Methoden und Techniken
Die Messung des Proteinausdrucks kann Hinweise auf die Aktivitäten der Gene in Ihrem Körper geben, da Proteine als der letzte Katalysator der Zellaktivitäten fungieren. Allerdings sind sich Pathologen und Biologen laut einem Artikel in der März 2010-Ausgabe von „LabMedicine“ noch nicht einig, ob Lichtfeldmikroskopie oder Fluoreszenzmikroskopie die geeignetste Methode zur Messung des Proteinausdrucks ist. Das Whole-slide-Brightfield-Scanning ist nicht nur einfach zu bedienen und bietet Chromogen-Stabilität, sondern kann Glasobjektträger auch länger schützen.
Dinge, die Sie benötigen
- Zellgewebe
- Objektträger
- Biotinylierter Sekundärantikörper
- Streptavidin-Herzenperoxidase
- 3,3'-Diaminobenzidin
- Farb-Linien-Scan-Kamera
Anweisungen
- Vorbereitung: Legen Sie das Zellgewebe auf einen Objektträger und fügen Sie einen biotinylierten Sekundärantikörper hinzu, gefolgt von einer Streptavidin-Herzenperoxidase und warten Sie zwei Minuten.
- Färbung: Gießen Sie vier Tropfen des 3,3'-Diaminobenzidins auf das Präparat und warten Sie zwei Minuten, bis die braune Färbung vollständig auf dem Präparat verteilt ist.
- Scannen: Legen Sie einen histologischen Schnitt des gefärbten Präparats auf eine motorisierte Plattform in einem gut beleuchteten Raum. Passen Sie die Farb-Linien-Scan-Kamera sorgfältig auf 20X- oder 40X-Vergrößerung an und scannen Sie das Präparat. Richten Sie die Streifen des Bildes aus und komprimieren Sie das digitale Bild in eine lesbare Dateigröße.
- Analyse: Drucken Sie das digitale Bild für die manuelle Analyse aus oder speisen Sie das Bild in Computer-Software für technologieunterstützte Analyse ein. Beobachten Sie das Muster der Färbungen, wie es im Bild dargestellt wird. Analysieren Sie sorgfältig den Proteinausdruck basierend auf den Mustern der Färbungen auf dem Präparat.
- Auswertung: Bewerten Sie den Proteinausdruck auf Krebszellen und Stroma, indem Sie die Konzentration des auf dem Zellgewebe exprimierten Proteins untersuchen.
- Quantifizierung: Verwenden Sie die Farbmuster, um den Proteinausdruck auf einer Skala von 0 bis 3+ zu quantifizieren. Verwenden Sie die Punktzahl, um den HER-Score oder den Allred-Score zu berechnen.
