Chloramphenicol ist ein breitspektrumwirksames Antibiotikum, das bakterielle Mikroben tötet, indem es ihre Fähigkeit zur Replikation beeinträchtigt. Dieses Antibiotikum wurde ursprünglich entwickelt, um Infektionen beim Menschen zu bekämpfen, aber laut Drug.com wird es heute, ab dieser Veröffentlichung, nur noch als letzte Option verwendet, wenn andere Medikamente aufgrund schwerwiegender Nebenwirkungen wie aplastische Anämie, hypoplastische Anämie, Thrombozytopenie und Granulozytopenie nicht wirken.
Chloramphenicol ist in einem Forschungslabor für Experimente der Molekularbiologie nützlich. Wenn Chloramphenicol auf einer Platte vorbereitet wird, kann es verwendet werden, um die Bakterienkonzentration zu erkennen oder bestimmte Bakterienstämme für weitere Experimente zu isolieren.
Was Sie benötigen
- Destilliertes Wasser
- Chloramphenicol
- 1,0 Prozent Trypton
- 0,5 Prozent Hefeextrakt
- 1,0 Prozent Natriumchlorid (NaCl) pH 7,0
- 95 Prozent Ethanol
- Agar
- 2-Liter-Kolben
- Magnetrührplatte
- Mittlerer Magnetrührstab
- Latex- oder Nitrilhandschuhe
- Laborwaage
- Autoklav
- 30 sterile 10-cm-Platten
- Blauer Markierstift
- Parafilm
- Aluminiumfolie
- Autoklavband
Anleitung
- Ziehen Sie ein Paar Latex- oder Nitrilhandschuhe an, um die LB-Brühe vorzubereiten. LB-Brühe ist eine gängige Abkürzung für Lysogenie-Brühe oder Luria-Brühe und wird als Wachstumsmedium für die Bakterienkultur verwendet. Sie kann im Labor von Grund auf hergestellt oder, um Zeit zu sparen, bei jedem Molekularbiologie-Lieferanten gekauft werden.
- Legen Sie ein Wiegepapier auf die Waage. Drücken Sie die Nulltaste der Waage, sodass das Gewicht des Papiers nicht im Endgewicht enthalten ist. Fügen Sie nach und nach kleine Mengen Trypton hinzu, bis Sie 10 g erreicht haben. Falten Sie dann das Wiegepapier in der Mitte mit dem Trypton in der Mitte. Heben Sie das Wiegepapier auf und verwenden Sie das gefaltete Papier vorsichtig als Trichter, um das Trypton in den 2-L-Kolben zu geben. Befolgen Sie dieses Verfahren, um 5 g Hefeextrakt, 10 g NaCl und 15 g Agar abzuwiegen.
- Lassen Sie den Rührstab in den Kolben fallen und zentrieren Sie den Kolben auf der Magnetrührplatte. Fügen Sie genug destilliertes Wasser hinzu, um die Lösung auf 1 Liter zu bringen.
- Schalten Sie die Rührplatte ein und beobachten Sie den Rührstab. Die Platte sollte auf die richtige Geschwindigkeit eingestellt sein, damit der Rührstab sich in einem gemäßigten Tempo bewegt, ohne an den Seiten des Kolbens festzustecken. Passen Sie die Einstellungen bei Bedarf an. Lassen Sie die Lösung auf der Platte stehen, bis alle Reagenzien gelöst sind.
- Schalten Sie die Rührplatte aus und spannen Sie ein 3-Zoll-Quadrat Parafilm über die Oberseite des Kolbens, um den Kolben vor Kontaminanten oder Verschütten zu schützen. Decken Sie dann den Parafilm mit einem Stück Aluminiumfolie ab und fügen Sie ein Stück Markierungs-Autoklavband auf der Folie hinzu.
- Platzieren Sie die Lösung für 20 Minuten bei 15 psi im Autoklaven im Flüssigzyklus, um sie zu sterilisieren.
- Entfernen Sie den Kolben aus dem Autoklaven. Er wird sehr heiß sein. Lassen Sie die Lösung auf etwa 55 Grad Celsius abkühlen, indem Sie sie bei Raumtemperatur stehen lassen oder den Kolben in ein 65-Grad-Celsius-Wasserbad stellen.
- Sprühen und wischen Sie die Arbeitsfläche mit 95-prozentigem Ethanol ab, um Kontamination zu verhindern. Es ist auch eine gute Idee, Ihre Handschuhe zu wechseln, bevor Sie die Platten handhaben.
- Markieren Sie die Seite und den Deckel jeder Platte mit einem vertikalen blauen Streifen mit dem Markierstift. Dies zeigt an, dass die Platten LB-Brühe und Chloramphenicol enthalten.
- Fügen Sie genug Chloramphenicol-Antibiotikum zur Lösung hinzu, damit die Konzentration den gewünschten Betrag erreicht, je nachdem, mit welchen Bakterien Sie arbeiten werden. Eine gängige Endkonzentration beträgt 100 ug/ml. Für diese Konzentration fügen Sie 1 mL Chloramphenicol-Stocklösung (bei 25 mg/ml) hinzu. Schwenken Sie den Kolben in kreisförmiger Bewegung oder stellen Sie ihn für 1 bis 2 Minuten zurück auf die Magnetrührplatte, um sicherzustellen, dass er gut vermischt ist.
- Wischen Sie die Öffnung des Kolbens mit Ethanol ab und gießen Sie dann die Lösung in die Platten, bis sie halb mit der Lösung gefüllt sind. Lassen Sie die Platten aushärten, bedecken Sie jede Platte mit einem Deckel und lagern Sie sie kopfüber bei 4 Grad Celsius, um ein Austrocknen zu verhindern.
