Dot-Blot-Analyse: Prinzipien, Anwendungen und Grenzen

Ein Dot-Blot oder Slot-Blot ist eine Technik, die Molekularbiologen verwenden, um Biomoleküle nachzuweisen, indem sie eine Mischung, die die Biomoleküle enthält, direkt als Punkt auf eine Membran auftragen. Nukleotidsonden oder Antikörper erkennen dann die Biomoleküle. Diese Methode liefert eine Bestätigung des Vorhandenseins oder Fehlens spezifischer Biomoleküle und liefert keine Informationen über die Größe der Biomoleküle, sodass andere Tests erforderlich sind.

Southern-Blot

Das Southern-Blotting ist ein Protokoll, das eine bestimmte DNA-Sequenz nachweist. Es kombiniert den Transfer von chemisch getrennten DNA-Fragmenten auf eine Filtermembran mit der Nachweis von Fragmenten, die durch Sondenhybridisierung gefunden werden. Southern-Blots bestimmen die Anzahl von Sequenzen oder Genkopien in einem Genom. Dieser Prozess ist nach dem britischen Biologen Edwin Southern benannt, der ihn 1975 entwickelte.

Northern-Blot

Das Northern-Blotting untersucht die Genexpression, indem es die RNA in einer Probe nachweist. Dieses Protokoll ermöglicht es, die Kontrolle einer Zelle über ihre Struktur und Funktion zu beobachten. Northern-Blotting bestimmt bestimmte Genexpressionen während der Entwicklungsstadien einer Zelle sowie bei abnormen oder krankhaften Zuständen. Northern-Blotting, das RNA-Proben nach Größe trennt, erkennt einen Teil der gesamten Zielsequenz. Ein Team von Wissenschaftlern der Stanford University entwickelte die Methode im Jahr 1977.

Western-Blot

Der Western-Blot, auch Protein-Immunoblot genannt, erkennt spezifische Proteine in einer Gewebeprobe. Er verwendet Gel-Elektrophorese, die native oder denaturierte Proteine nach ihrer Polypeptidlänge oder nach der Struktur des Proteins trennt. Nachdem Biologen die Proteine auf eine Membran übertragen haben, verwenden sie Antikörper, die spezifisch für das Zielprotein sind, um sie nachzuweisen. Western-Blotting wird zur Diagnose von HIV, Rinderseuche, einigen Formen der Lyme-Krankheit, Hepatitis B und felinem AIDS verwendet.

Southwestern-Blotting

Southwestern-Blotting beinhaltet die Identifizierung und Charakterisierung von DNA-bindenden Proteinen anhand ihrer Fähigkeit, an spezifische Sonden zu binden. Dieser Prozess – durchgeführt mittels Gel-Elektrophorese und anschließendem Transfer auf spezifische Zellmembranen – kombiniert die Protokolle des Southern- und Western-Blottings.