HPLC- Technik

HPLC steht für Hochleistungs-Flüssigkeits- Chromatographie, einer in der analytischen Labors verwendeten Standard qualitative und quantitative Analyseverfahren . HPLC ist zuverlässig und reproduzierbar , wodurch es das bevorzugte Verfahren zur Trennung , Identifizierung und Quantifizierung von Molekülen aus komplexen Mischungen von chemischen und biologischen Komponenten sind. Vier Komponenten

Die HPLC-Technik enthält vier Hauptkomponenten . Erstens ist die Lösungsmittelzufuhrsystem(der mobilen Phase ), die durch die Säule der Proben trägt , wichtig, da die Polarität der Fähigkeit des Systems , um die Moleküle zu trennen beeinflusst . Die Chromatographiesäule ist in der Regel eine vertikale Glassäule , die mit einem Adsorptionsmittel gefüllt ist. Zweitens ist das Adsorbens (auch als stationäre Phase bezeichnet, da sie sich nicht bewegt ), die üblicherweise Kieselgel oder Aluminiumoxid. Drittens besteht das Probeneinführungssystem einer Art von Einspritzöffnung , um die Probe einzuführen , in das Lösungsmittelzufuhrsystemanalysiert werden. Die vierte Komponente ist der Detektor .
Detektoren

Detektortyp verwendet wird, hängt von der Art der Probe die Techniker ausgeführt werden und welche Moleküle sie versuchen zu isolieren. Die Kriterien der Techniker verwendet, bei der Wahl eines Detektors umfassen Selektivität , Signal-zu- Rausch-Verhältnis , Nachweisgrenze , linearen Bereich , Zeitkonstante , Drift-und Zellvolumen . Häufig verwendete Detektoren UV-VIS- Detektoren , Massenspektrometer , Brechungsindizes , Fluoreszenz- Detektoren oder VerdampfungslichtstreuGeräte.
Ordnung

Schalten Sie den Detektor , die Pumpen ( die verwendet werden, um Druck auf die mobile Phase durch die stationäre Phase zu bewegen hinzufügen ) , und der Computer, aufzeichnen und drucken Sie das Chromatogramm wird . Wählen Sie die gewünschten Programme, um die gewünschten Daten zu sammeln. Injizieren Sie die Probe in der Einspritzöffnung . Halten Sie ein Auge auf den Druck. Jede Art von Säule einen maximalen Druck ; dies nicht überschreiten oder Trennung erfolgt nicht. Drucken Sie das Chromatogramm und die Ergebnisse analysieren . Am Ende jeder Fahrt , ist es wichtig zu spülen, die Einspritzöffnung , um Ablagerungen zu verhindern , die Blockaden zu erstellen.
Typen

hydrophile Interaktions-Chromatographie verwendet einen gebundenen polaren stationäre Phase und eine unpolare , mit Wasser mischbaren mobilen Phase , um Moleküle basierend auf Polarität zu trennen. Diese Technik hat die Fähigkeit, saure, basische und neutrale Proben in einem einzigen chromatogram.Normal Phase-Chromatographie getrennt verwendet eine polare stationäre Phase und eine unpolare , nicht-wässrigen mobilen Phase zu Strukturisomeren (Moleküle mit der gleichen Molekülformel , die in Atomen miteinander verbunden sind trennen verschiedene Arten ) . Reversed Phase Chromatographie ist die am weitesten verbreitete Art der HPLC . Es verwendet eine nichtpolare stationäre Phase und eine wäßrige wenig polaren mobilen Phase . Dieses Verfahren wird allgemein von pharmazeutischen Unternehmen verwendet werden, um Medikamente zu qualifizieren , bevor release.Size Ausschluss-Chromatographie trennt Moleküle auf der Grundlage ihrer Größe, und kann auch die Struktur der proteins.Ion Austausch-Chromatographie zu bestimmen, ist auf der Anziehung zwischen den Ionen in dem gelösten Stoff und die geladenen Stellen auf der Basis auf der stationären Phase gebunden.
Verwendet

HPLC ist in einer Vielzahl von Anwendungen. Es kann verwendet werden, um pharmazeutische Materialien , die hilfreich bei der Erforschung neuer Arzneimittel sowie Reinigung bestehende ist zu analysieren. Es wird auch verwendet , um biologische Flüssigkeiten , Pestizide, Sprengstoffen und anderen Materialien zu analysieren. Es ist zwar eine beliebte Technik für biomedizinische , biochemischen und pharmazeutischen Forschung, ist es auch in der Kosmetik-, Lebensmittel-, Umwelt -und Energieindustrie eingesetzt.