Säurefeste Färbung: Techniken und Anwendungen

Säurefeste Färbung

Der Zweck der säurefesten Färbung ist es, säurefeste Organismen von nicht-säurefesten Organismen zu trennen oder zu unterscheiden. Diese säurefesten Organismen reagieren nicht auf Farbstoff wie reguläre Organismen und können daher unter einem Mikroskop schwer zu beobachten sein. Die säurefeste Färbung kann diese Organismen für Beobachtungszwecke für medizinische Tests färben, wie die Bestimmung der Mengen bestimmter Bakterien und Mikroorganismen bei HIV-Patienten. Mycobacterium und Nocardia sind zwei spezifische Beispiele für säurefeste Organismen, die im Allgemeinen bei säurefesten Färbungstests getestet werden.

Verfahren

Die meisten Bakterien werden mit einem Farbstoff namens Gram-Färbemittel oder Ethanol gefärbt, um unter einem Mikroskop beobachtet zu werden. Säurefeste Zellen, wie mykobakterielle Zellen, widerstehen der Färbung mit Kontention-Farbstoff aufgrund des Lipidgehalts in der Zellwand. Infolgedessen muss ein spezielles Verfahren durchgeführt werden, um diese schwer zu färbenden Zellen zu färben. Es gibt drei verschiedene Techniken, die Farbstoff auf diese säurefesten Bakterien auftragen, die tatsächlich in der Lage sind, das Pigment der Zellen zu verändern, trotz der Widerstandsfähigkeit gegen Farbstoff. Diese drei Verfahren werden Ziehl-Neelsen-Färbung, Kinyoun-Färbung und Fluorochrom-Färbung genannt. Diese Färbungsmethoden erzeugen eine dauerhaftere Pigmentierung, und die säurefesten Bakterien bleiben länger gefärbt als Zellen, die mit traditionellem Farbstoff gefärbt wurden, sobald das Verfahren abgeschlossen ist.

Ziehl-Neelsen-Färbung

Die Ziehl-Neelsen-Färbung unterscheidet sich von anderen Färbungsformen, weil sie Hitze verwendet, um die säurefesten Bakterien zu färben. Die Ziehl-Neelsen-Färbung ist eine zweistufige Technik. Eine bakterielle Probe wird genommen und in der ersten Stufe der Technik mit einem Carbol-Fuchsin-Farbstoff gesättigt. Dieser Objektträger, zusammen mit dem Carbol-Fuchsin-Farbstoff, wird dann erhitzt. Während des Erhitzungsprozesses verliert der säurefeste Bakterium seine Farbe und nimmt die Farbe des Carbol-Fuchsin-Farbstoffs an (normalerweise eine rote Farbe). Sobald dies abgeschlossen ist, wird eine Methylenblau-Substanz aufgetragen. Die Methylenblau-Substanz bindet nicht an die säurefesten Bakterien aufgrund der Lipide in der Zellwand, aber sie bindet an die anderen Organismen auf dem Objektträger. Infolgedessen sind zwei verschiedene Farben vorhanden: Die säurefesten Bakterien sind rot gefärbt und die anderen Organismen blau. Die beiden Organismen können nun durch ihre Farbe unterschieden werden, wenn sie unter einem Mikroskop untersucht werden.

Kinyoun-Methode

Die Kinyoun-Methode verwendet keine Hitze, um die säurefesten Bakterien zu färben. Stattdessen verwendet diese Technik einfach einen viel stärkeren und konzentrierteren Fusion-Farbstoff. Dieser konzentrierte Farbstoff bindet nur an säurefeste Bakterien, während ein anderer Farbstoff aufgetragen wird, der nur an nicht-säurefeste Organismen bindet. Wiederum ergeben sich zwei verschiedene Farben, was es ermöglicht, die säurefesten Bakterien und Organismen von den nicht-säurefesten Organismen unter einem Mikroskop zu unterscheiden.

Fluorochrom-Färbung

Die letzte Methode, Fluorochrom-Färbung, verwendet eine andere Technik zum Auslesen der Ergebnisse. Wiederum werden zwei Arten von Farbstoff unter dieser Technik aufgetragen, was zu unterschiedlich gefärbten säurefesten und nicht-säurefesten Organismen führt. Allerdings ist der auf die säurefesten Organismen aufgetragene Farbstoff ein Fluorochrom-Farbstoff, der fluoreszierend ist. Ein spezielles Fluoreszenzmikroskop wird dann verwendet, um die Ergebnisse abzulesen, welches den fluoreszierenden Farbstoff identifizieren kann, der nur die säurefesten Organismen gefärbt hat.

Wann wird die säurefeste Färbung durchgeführt?

Die Technik der säurefesten Färbung wird bei Tests für Krankheiten verwendet, die durch Mykobakterien verursacht werden. Mykobakterien verursachen Infektionen, die tuberkuloseähnliche Symptome aufweisen. Typischerweise treten diese Infektionen nur bei Menschen mit geschwächtem Immunsystem auf, wie HIV- oder AIDS-Patienten.