NBT-Testprotokolle: Anwendungen in Biochemie und Immunologie

NBT-Testprotokolle: Anwendungen in Biochemie und Immunologie

NBT oder Nitroblau-Tetrazolium ist eine chemische Verbindung, die in der Biochemie und Immunologie zum Nachweis des Enzyms alkalische Phosphatase verwendet wird. Die Substanz wird auch im Diagnosetest der chronisch granulomatösen Erkrankung verwendet, die die Abwehrzellen betrifft. NBT-Testprotokolle umfassen Immunoblotting, BCIP/NBT-alkalische Phosphatase-Substratlösung und Nachweis von Galaktosidase und alkalischer Phosphatase-Aktivität in Gewebe.

Immunoblotting

Immunoblotting ist eine Technik zum Nachweis von Antikörpern, die Proteine sind, die am Abwehrprozess beteiligt sind, sagt Susan R. Haynes in „RNA-Protein Interaction Protocols.“ Dies umfasst die Verwendung von NBT, sowie bovines Serumalbumin, Primärantikörper 9E10, Coomassie-Färbelösung, Nitrozellulosemembranen, Trisbasis-Pufferlösung, Ammoniumpersulfat, Natriumdodecylsulfat und wassergesättigtes Buthanol.

BCIP/NBT Alkalische Phosphatase Substratlösung

Techniker bereiten eine Lösung mit drei Tropfen 1 Prozent 5-Brom-4-chlor-3-indolylphosphat (BCIP), drei Tropfen 1,5 Prozent NBT, zwei Tropfen der chemischen Substanz Levamisol und alkalischer Phosphatase (AP)-Puffer bei pH 9,5 vor, gemäß der IHC World Website. Die Lösung wird dann bei Raumtemperatur inkubiert und ist zur Verwendung bereit.

Nachweis von Galaktosidase und alkalischer Phosphatase-Aktivität in Gewebe

Galaktosidasen sind Enzyme, die das Galaktosidmolekül spalten können, das in den Bakterien Escherichia coli und anderen Organismen vorkommt. Laut Protocol Online verwenden Biologen während dieses Protokolls Rattenzellproben, die mit PBS-Lösung, Glutaraldehyd und Paraformaldehyd behandelt wurden. Dann bereiten sie die Brom-Chlor-Indolyl-Galaktopyranosid- oder X-gal-Reaktionspuffer für die Proben vor, unter Verwendung von Kaliumferrocyanid, Magnesiumchlorid, Natriumdeoxycholat und dem Reinigungsmittel Nonidet P-40. Techniker können Nitroblau-Tetrazolium (NBT) anstelle von Kaliumferrocyanid als schnellere Alternative verwenden. Zellproben werden später unter dem Mikroskop beobachtet.