DAPI steht für die Chemikalie 4'-6-Diamidino-2-phenylindole und wird verwendet, um doppelsträngige DNA zu färben. Die Verbindung bildet blaue fluoreszierende Komplexe mit Zellkernen und wird daher häufig verwendet, um die Struktur von Zellen hervorzuheben. Die Art und Dichte der Färbung kann auch abgestorbene oder sterbende Zellen identifizieren.
DAPI-Lösung vorbereiten
- Die DAPI-Lösung muss zunächst in eine Arbeitslösung verdünnt werden. Zum Beispiel müssen 10 mg des Invitrogen DAPI-Produkts mit 2 ml deionisiertem Wasser gemischt und dann weiter auf 300 Nano-Molar konzentriert werden (Anweisungen sind auf dem Produkt vorhanden) mit pufferter Kochsalzlösung (PBS).
Proben vorbereiten
- Fixieren Sie die Probe je nach Art der zu testenden Probe auf einem Objektträger. Geben Sie 300 Mikroliter der DAPI-Arbeitslösung auf die Probe und inkubieren Sie sie ein bis fünf Minuten lang. Spülen Sie den Objektträger mit PBS ab.
Analyse
- Verwenden Sie ein Fluoreszenzmikroskop, um den auf Objektträger montierten Proben zu betrachten. Die DAPI-gefärbten Kerne können an einer blauen Fluoreszenz erkannt werden.
