Wie auf LB-Agarplatten Stellen

Agar ist eine gallertartige Substanz , aus Rotalgen hergestellt und für eine Vielzahl von Zwecken verwendet . Eine der häufigsten Anwendungen ist als Kulturmedium für Bakterien. LB-Agar ist Nähragar , die mit Lysogenie Brühe (LB) kombiniert wurde . Es ist eine allgemein verbreitete Irrtum, dass LB steht für Luria - Bertani . Doch seinem Erfinder , Giuseppe Bertani , stellt in seinem Papier " Lysogenität in Mid- Twentieth Century : P1, P2, und andere Experimentalsysteme ", dass die Initialen wurden immer die Absicht, für Lysogenie Brühe stehen , nicht sein Name und der seines coresearcher , Salvador Luria . LB-Agar ist vielseitig und relativ einfach zu machen. Was Sie brauchen
Für 1 l fertige Medium:
Skala und einem Gewicht von Papieren oder Schalen
1 -L -Messzylinder
1 L destilliertem oder entsalztem Wasser
2 -L -Erlenmeyerkolben
10 g Trypton
5 g Hefeextrakt
5 g Kochsalz noniodized
15 g Agar
Aluminiumfolie
Wasserdicht Ofenhandschuhe
Autoklav oder Dampfkochtopf
Sterile Petrischalen
anzeigen Weitere Anweisungen
1 Verwenden Sie einen Erlenmeyerkolben , die doppelt hält das Volumen des Mediums Sie beabsichtigen , sich vorzubereiten.

Legen Sie die Trypton , Hefeextrakt und Salz in den Erlenmeyerkolben .
2 Achten Sie genau auf den Druck des Autoklaven oder Dampfkochtopf bei der Sterilisation .

Fügen Sie die Zugabe von destilliertem Wasser und Sir oder schütteln, um die meisten der trockenen Zutaten zu lösen.
3

In der Agar- und weiter zu schütteln oder umrühren. Alle von der Agar lösen sich nicht auf , aber es ist wichtig, dass Sie die meisten davon in Lösung. Vermeiden Sie große Klumpen von ungelösten Agar , sich in der Unterseite der Flasche .
4

Verschließen Sie die Öffnung der Flasche mit Folie.
5

Der Kolben wird in einem Autoklaven - sichere Container.
6

Gießen Sie etwa 1 cm Wasser in den Behälter .
7

Setzen Sie den Behälter und Kolben in den Autoklaven . Gesetzt den Autoklaven für einen Flüssigkeitskreislaufzu sterilisieren und für mindestens 20 Minuten. Wenn Sie einen Schnellkochtopf für die Sterilisation , gehen Sie zu Schritt 8 fort. Andernfalls fahren Sie mit Schritt 10 fort.
8

Wenn Sie mit einem Schnellkochtopf , legen Sie eine kleine Menge Wasser in den Kocher und den Kolben mit im Wasser. Versuchen Sie nicht, mehr als 250 ml zu einem Zeitpunkt, zu sterilisieren mit dieser Methode.
9

Bringt den Schnellkochtopf auf etwa 20 psi und sterilisieren Sie für etwa 30 Minuten.
10

entfernen Sie den Kolben aus dem Autoklaven oder Dampfkochtopf, die Betreuung während der Kolben wird sehr heiß sein.
11

die Flasche vorsichtig schwenken , sobald die Sterilisation abgeschlossen ist. Dies wird die Agar gleichmäßiger zu verteilen gesamten Lösung .
12

die Flasche auf einer geeigneten Oberfläche setzen und lassen Sie es ein bisschen abkühlen. Wenn Sie ein oder mehrere L Medium vorbereitet haben , geben Sie ihm eine sanfte Wirbel alle 10 bis 20 Minuten. Sie werden in der Lage zu sagen , dass das Medium ausreichend abgekühlt ist , wenn man die Rückseite der Finger gegen die Flasche für ca. 2 Sekunden ohne daß es unangenehm heiß an zu halten. Warten Sie etwa 15 bis 20 Minuten , bevor Sie versuchen diese .
13

Legen Sie eine Petrischale auf einer ebenen Fläche . Heben Sie den Deckel in einem Winkel , so dass die meisten der Schale bedeckt ist links . Den Deckel heben Sie nicht direkt von der Platte .
14

das Medium aus der Flasche in die Petrischale gießen , bis das Gericht über halb voll.
15

sofort austauschen der Deckel , bewegen Sie den Teller beiseite und ziehen weiter zum nächsten , bis alle gewünschten Platten gefüllt wurden . Die Platten werden ihre Erstarrung in ca. 30 Minuten zu beenden.
16

die Petrischalen Platz in der sterilen Beutel in dem sie angekommen sind oder einem anderen geeigneten , sterilen Behälter , wenn Sie sie nicht sofort Impfen . Verschließen Sie den Behälter , um Feuchtigkeit zu bewahren. Beschriften Sie die Platten , wenn gewünscht. Wenn Sie die Platten speichern , sollten sie bei einer Temperatur von etwa 39 bis 40 Grad F.

gehalten werden