Agar ist eine gallertartige Substanz, die aus roten Algen hergestellt wird und für verschiedene Zwecke verwendet wird. Eine ihrer häufigsten Verwendungen ist als Nährmedium für Bakterien. LB-Agar ist Nähr-Agar, der mit Lysogenie-Brühe (LB) kombiniert wurde. Es ist ein weit verbreiteter Irrtum, dass LB für Luria-Bertani steht. Sein Erfinder, Giuseppe Bertani, erklärt jedoch in seinem Papier „Lysogeny at Mid-Twentieth Century: P1, P2, and Other Experimental Systems“, dass die Initialen stets für Lysogenie-Brühe stehen sollten, nicht für seinen Namen und den seines Mitforschers Salvador Luria. LB-Agar ist vielseitig und recht einfach herzustellen.
Für 1 Liter fertiges Medium benötigen Sie:
- Waage und Wiegepapier oder -schalen
- 1-Liter-Messzylinder
- 1 Liter destilliertes oder deionisiertes Wasser
- 2-Liter-Kolben
- 10 g Trypton
- 5 g Hefeextrakt
- 5 g jodfreies Speisesalz
- 15 g Agar
- Aluminiumfolie
- Wasserdichte Backofenhandschuhe
- Autoklav oder Schnellkochtopf
- Sterile Petrischalen
Anleitung
- Geben Sie Trypton, Hefeextrakt und Salz in den Kolben.
- Fügen Sie das destillierte oder deionisierte Wasser hinzu und rühren oder schütteln Sie, um die meisten trockenen Inhaltsstoffe aufzulösen.
- Geben Sie das Agar hinzu und schütteln oder rühren Sie weiter. Nicht alles Agar wird sich auflösen, aber es ist wichtig, dass Sie den größten Teil in Lösung bringen. Vermeiden Sie große Klumpen unaufgelöstes Agar, die sich am Boden Ihres Kolbens absetzen.
- Verschließen Sie die Öffnung des Kolbens mit Folie.
- Stellen Sie den Kolben in einen autoklavgeeigneten Behälter.
- Gießen Sie etwa 1 cm Wasser in den Behälter.
- Stellen Sie den Behälter und den Kolben in den Autoklav. Stellen Sie den Autoklav auf einen Flüssigzyklus und sterilisieren Sie mindestens 20 Minuten lang. Wenn Sie einen Schnellkochtopf zur Sterilisation verwenden, gehen Sie zu Schritt 8. Andernfalls überspringen Sie zu Schritt 10.
- Wenn Sie einen Schnellkochtopf verwenden, geben Sie eine kleine Menge Wasser in den Topf und stellen Sie den Kolben ins Wasser. Versuchen Sie nicht, mehr als 250 ml auf einmal mit dieser Methode zu sterilisieren.
- Bringen Sie den Schnellkochtopf auf etwa 20 psi und sterilisieren Sie etwa 30 Minuten lang.
- Entfernen Sie den Kolben aus dem Autoklav oder Schnellkochtopf, wobei Sie vorsichtig sein müssen, da der Kolben sehr heiß sein wird.
- Schwenken Sie den Kolben nach Abschluss der Sterilisation sanft. Dadurch wird das Agar gleichmäßiger in Ihrer Lösung verteilt.
- Stellen Sie den Kolben auf eine geeignete Oberfläche und lassen Sie ihn etwas abkühlen. Wenn Sie 1 Liter oder mehr Medium zubereitet haben, schwenken Sie es sanft alle 10 bis 20 Minuten. Sie können erkennen, dass das Medium ausreichend abgekühlt ist, wenn Sie den Rücken Ihrer Finger etwa 2 Sekunden lang gegen den Kolben halten können, ohne dass es unangenehm heiß ist. Warten Sie etwa 15 bis 20 Minuten, bevor Sie dies versuchen.
- Platzieren Sie eine Petrischale auf einer flachen Oberfläche. Heben Sie den Deckel schräg an, sodass die meiste Schale bedeckt bleibt. Heben Sie den Deckel nicht gerade von der Platte ab.
- Gießen Sie das Medium aus dem Kolben in die Petrischale, bis die Schale etwa halb voll ist.
- Setzen Sie sofort den Deckel wieder auf, schieben Sie die Platte beiseite und fahren Sie mit der nächsten fort, bis alle gewünschten Platten gefüllt sind. Die Platten vollenden ihre Verfestigung in etwa 30 Minuten.
- Platzieren Sie die Petrischalen in der sterilen Tasche, in der sie angekommen sind, oder einem anderen geeigneten, sterilen Behälter, wenn Sie sie nicht sofort impfen. Verschließen Sie den Behälter, um die Feuchtigkeit zu bewahren. Beschriften Sie die Platten nach Wunsch. Wenn Sie die Platten lagern, sollten sie bei einer Temperatur von etwa 39 bis 40 Grad F aufbewahrt werden.
