Im TBARS-Test (Thiobarbitursäure-reaktive Substanzen) für Lipidperoxidation ist die Gewebehomogenisierung durch Zerkleinerung für die analytische Genauigkeit kritisch.
Warum Gewebe zerkleinern?
- Zellstörung: Bricht Plasmamembranen, Organellen auf, setzt intrazelluläre Lipide (Phospholipide, Cholesterinester) ins Homogenat frei.
- Erhöhte Oberfläche: Verbessert Lösungsmittelpenetration (Chloroform:Methanol 2:1) für Lipidextraktion (Folch/Bligh-Dyer-Methode).
- Freisetzung gebundenes MDA: Malondialdehyd (MDA) Addukte an Proteine (Lysin ε-Amino-Gruppen). Mechanische Scherkraft + Säurehydrolyse (im Test) befreien MDA für TBA-Reaktion.
- Homogenität: Gewährleistet repräsentative Probenahme; reduziert Variabilität zwischen Aliquoten.
Methoden
- Manuell: Mörser & Stößel (flüssiger Stickstoff für Schockfrostung).
- Mechanisch: Polytron, Perlenmühle, Dounce-Homogenisator.
- Optimieren: Kühl halten (4 °C), Antioxidantien (BHT) hinzufügen, um artefaktuelle Oxidation zu verhindern.
Kernaussage
Gewebezerkleinerung gewährleistet vollständige Lipidextraktion, Freisetzung proteingebundener Peroxidationsprodukte und reproduzierbare TBARS-Messungen.
