ELISA-Test: Antikörpernachweis und Anwendungen verstehen

Einleitung

Der ELISA-Test oder Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ist der am häufigsten kommerziell verwendete Test zum Nachweis von Antikörpern. Dieser Test wird zum Screening von Drogenkonsum, Schwangerschaft, AIDS und Hepatitis sowie anderen Erkrankungen eingesetzt. Dieser Test ist aufgrund der einfachen Handhabung und niedrigen Kosten beliebt.

Was Sie benötigen

• Serumprobe
• ELISA-Platte
• Antigene, die den zu testenden Antikörper konjugieren
• Enzym-gebundene Antikörper oder Sekundärantikörper
• Enzym-gebundener Farbwechsel-Indikator
• Papierhandtücher
• Schutzbrille

Anleitung

1. Legen Sie ein bekanntes Antigen auf die Oberfläche mehrerer Vertiefungen.

   Bedecken Sie jede Vertiefung mit 50 Mikrolitern IgG-Flüssigkeit. Stören Sie die Vertiefungen nicht, bis 5 Minuten vergangen sind. Spülen Sie die Vertiefungen mit Leitungswasser. Wiederholen Sie den Spülvorgang fünfmal. Klopfen Sie die Vertiefung auf ein Papierhandtuch, um sie zu trocknen. Wischen Sie die Vertiefungen nicht ab.

2. Fügen Sie Proben von Körperflüssigkeit, genannt Serum, zu den Platten hinzu. Diese Körperflüssigkeitsproben können die Konjugat- und Wettbewerberlösung zu den Vertiefungen enthalten. Dies bindet sich, wenn Antikörper vorhanden sind. Die Serumproben müssen verdünnt werden, damit sie sich an das in Schritt 1 aufgetragene Antigen konjugieren.

3. Fügen Sie ein Protein wie Casein zu den Vertiefungen hinzu. Dies verhindert, dass andere Proteine, die nicht getestet werden, an der Platte haften.

4. Waschen Sie die Platte, indem Sie sanft Leitungswasser über die Vertiefungen gießen. Klopfen Sie anschließend die Seite der Platte auf ein Papierhandtuch, um überschüssiges Wasser zu entfernen. Wiederholen Sie den Waschvorgang vier weitere Male. Wischen Sie die Vertiefungen nicht ab. Fügen Sie den Antikörper, der dem zu testenden entspricht, zu den Vertiefungen hinzu.

5. Waschen Sie die Platte, indem Sie sanft Leitungswasser über die Vertiefungen gießen. Klopfen Sie anschließend die Seite der Platte auf ein Papierhandtuch, um überschüssiges Wasser zu entfernen. Wischen Sie die Vertiefungen nicht ab. Wiederholen Sie den Waschvorgang vier weitere Male. Dieser Waschvorgang entfernt jedes Antigen, das nicht gebunden ist. Die Vertiefungen enthalten nun nur noch Antikörper-Antigen-Komplexe, die getestet werden. Waschen Sie die Platte. Dadurch werden alle ungebundenen Antikörper-Enzym-Konjugate entfernt.

6. Fügen Sie Sekundärantikörper, auch Anti-Antikörper genannt, zu den Vertiefungen hinzu. Diese haften an den Nachweisantikörpern. Die Sekundärantikörper sind an den Farbwechsel-Indikator und an das Antigen konjugiert, das in Schritt 1 in die Vertiefung gegeben wurde.

7. Waschen Sie die Platte, indem Sie sanft Leitungswasser über die Vertiefungen gießen. Klopfen Sie anschließend die Seite der Platte auf ein Papierhandtuch, um überschüssiges Wasser zu entfernen. Wischen Sie die Vertiefungen nicht ab. Wiederholen Sie den Waschvorgang vier zusätzliche Male. Dadurch werden zusätzliche enzymgebundene Antikörper entfernt, die nicht gebunden sind.

8. Tragen Sie einen enzymgebundenen Farbwechsel-Indikator auf die Platte auf.

   Dies bewirkt, dass sich die Vertiefungen, die die zu testenden Antikörper enthalten, verfärben.

9. Beobachten Sie die Vertiefungen der Platte auf eine Farbveränderung, die das Vorhandensein des Antikörpers in der Körperflüssigkeitsprobe anzeigt.