Agarplatte herstellen: Ein umfassender Leitfaden für Mikrobiologie

Molekularbiologie und Bakteriologie verwenden Agarplatten, um Mikroorganismen wie Bakterien für Experimente zu kultivieren. Das Agar ist das Mittel, das eine flüssige Nährmedium, das vom Mikroorganismus zum Überleben und Wachsen benötigt wird, verfestigt oder geliert. Sobald auf eine Agarplatte übertragen, wachsen die Bakterien zu unterschiedlichen Kolonien (bei niedrigen Konzentrationen) oder Schmierpräparaten (bei hohen Konzentrationen) heran und können zur Analyse geerntet werden. Biologen bereiten Agarplatten zu, da der Prozess Zugang zu laborqualitativen Reagenzien und Maschinen sowie ein gutes Verständnis von Molekularbiologie und sterilen Techniken erfordert.

Was Sie benötigen

• Handschuhe
• Laborkittel
• Gesichtsmaske
• Bunsenbrenner
• Laminarer Luftstromschrank
• Sterile Petrischalen
• 10 g Bacto-Trypton
• 5 g Hefeextrakt
• 15 g Agarose
• 1 mL 1N NaOH
• Steriles destilliertes Wasser
• Glasflasche
• Autoklavband
• Autoklav
• Ergänzungen, z. B. Antibiotika wie Ampicillin

Anleitung

1. • Tragen Sie die richtige Schutzausrüstung, einschließlich Handschuhen, einem Laborkittel und einer Gesichtsmaske, und dekontaminieren Sie alle Oberflächen. Arbeiten Sie neben einem Bunsenbrenner oder, vorzugsweise, in einem sterilen laminaren Luftstromschrank. Dies verhindert, dass luftgetragene Verunreinigungen in das Agar fallen.

   • Entfernen Sie den Stapel Petrischalen aus ihrer Verpackung, bewahren Sie ihn jedoch zum erneuten Verpacken der Agarplatten auf. Beschriften Sie die äußere Oberfläche der Schale (nicht den Deckel) mit der Art des Agars und dem Herstellungsdatum. Legen Sie die Platten als einzelne Schicht mit entfernten Deckeln aus, um das Gießen des Agars zu erleichtern.

   • Mischen Sie Bacto-Trypton, Hefeextrakt und Agarose miteinander und fügen Sie dann die Natriumhydroxidlösung (NaOH) hinzu. Fügen Sie steriles destilliertes Wasser hinzu, um 1 L Nährmedium zu erhalten. Übertragen Sie diese Lösung in eine Glasflasche mit mindestens 1,5 L Volumen. Schrauben Sie den Deckel der Flasche locker auf und beschriften Sie das Herstellungsdatum und den Namen des Mediums. Bringen Sie ein Stück Autoklavband auf der Flasche an und autoklavieren Sie sie 25 Minuten lang. Lassen Sie die Flasche auf nicht weniger als 45 Grad Celsius abkühlen (sonst härtet sie zu früh aus) aber nicht höher als 50 Grad Celsius. Sie können Flaschen mit abgekühltem und erstarrtem Agar bei 4 Grad Celsius lagern und dann erwärmen, bis er verflüssigt ist. Falls für Ihr spezielles Experiment oder Ihren Bakterienstamm erforderlich, fügen Sie die entsprechende Art und Menge an Ergänzung wie Antibiotika hinzu. Wenn das Medium zu heiß ist, werden die Ergänzungen zerstört, überprüfen Sie daher sorgfältig die Temperatur des Mediums, bevor Sie fortfahren.

   • Gießen Sie ein ausreichendes Volumen Agar, um die Schale zur Hälfte zu füllen, während das Agar noch warm und verflüssigt ist. Stellen Sie sicher, dass die Oberfläche vollständig bedeckt ist. Gießen Sie keine übermäßige Menge oder lassen Sie das Agar die Oberkante der Schale erreichen. Halten Sie die Platten in einer sterilen Atmosphäre, indem Sie den Bunsenbrenner oder den laminaren Luftstromschrank kontinuierlich laufen lassen. Lassen Sie die Platten aushärten und setzen Sie dann die Deckel wieder auf.

   • Trocknen Sie die Agarplatten etwa 30 Minuten bis eine Stunde lang in einem Ofen, der auf nicht mehr als 37 Grad Celsius eingestellt ist. Alternativ können Sie sie drei Minuten lang im laminaren Luftstromschrank lassen oder auf einem dekontaminierten Labortisch in einem wenig frequentierten Bereich, der nicht zugig ist, für ein oder zwei Tage. Das Trocknen der Platten verhindert, dass jede auf die Agaroberfläche aufgebrachte Bakterienlösung einfach verdünnt und herunterrutscht, anstatt Kolonien zu bilden, die am Agar haften.

   • Bewahren Sie die Platten sorgfältig dunkel und bei 4 Grad Celsius auf. Stapeln Sie die getrockneten Agarplatten mit dem Boden nach oben, um die Beschriftungen deutlich sehen zu können und zu verhindern, dass Mikroorganismen und Schmutz auf die Agaroberfläche fallen und sie kontaminieren. Legen Sie die Schalen zurück in ihre Verpackung, bedecken Sie sie mit Aluminiumfolie und kleben Sie die Verpackung zu. Beschriften Sie die verpackten Platten mit ihrem Inhalt und dem Herstellungsdatum. Sie können die Platten bis zu zwei Monate lagern und sollten sie danach entsorgen.