ELISA-Test: Farbwechsel von farblos zu farbig erklärt

Wie funktioniert die Farbentwicklung beim ELISA-Test?

Beim ELISA-Test (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) kommt es nicht zu einem Farbumschlag von dunkel, etwa Schwarz oder Grau, hin zu klar. Stattdessen verläuft der Farbwechsel typischerweise von farblos zu einer sichtbaren Farbe, was auf das Vorhandensein oder Fehlen des gesuchten Zielanalyten hinweist.

Ablauf des ELISA-Tests

Der Test folgt einer Reihe standardisierter Schritte:

1. Beschichtung: Die Mikroplattenvertiefungen werden mit einem für den Zielanalyten spezifischen Fängerantikörper beschichtet.
2. Probenzugabe: Die Probe oder ein Standard, der den Analyten enthält, wird hinzugefügt.
3. Inkubation und Waschen: Dies ermöglicht die Bindung des Analyten an den Fängerantikörper.
4. Nachweisantikörper: Ein mit einem Enzym konjugierter Nachweisantikörper, beispielsweise Meerrettichperoxidase oder alkalische Phosphatase, wird zugegeben.
5. Weitere Inkubation und Waschschritte: Damit bindet der Nachweisantikörper an den eingefangenen Analyten.
6. Substratzugabe: Ein für das Enzym spezifisches Substrat wird hinzugefügt.
7. Stopp der Reaktion: Nach der Inkubation wird die enzymatische Reaktion gestoppt und die Farbentwicklung abgeschlossen.

Ergebnisauswertung

Der letzte Schritt führt zu einer Farbänderung, die spektrophotometrisch bei einer bestimmten Wellenlänge gemessen werden kann. Der Farbwechsel erfolgt typischerweise von farblos zu einer sichtbaren Farbe wie Gelb, Blau oder Rot. Die Intensität der Farbe ist proportional zur Menge des in der Probe vorhandenen Analyten.

Zusammenfassend lässt sich sagen: Beim ELISA-Test erfolgt der Farbumschlag von farblos nach farbig, nicht von dunkel nach klar.