Perfusion-Technik: Prinzipien, Anwendungen und Verfahren

Perfusion-Technik: Prinzipien und Verfahren

Die Perfusionstechnik ermöglicht eine schnelle und gleichmäßige Fixierung aller einzelnen Zellen im Gewebe. Eine 4-prozentige Paraformaldehyd-Fixierlösung wird über das Gefäßsystem zugeführt, um das Gewebe von Interesse zu erhalten. Der Hauptzielort für die Medikamentenverabreichung in einem bestimmten Organ kann mit Hilfe dieser Technik identifiziert werden. Perfusion hat Wissenschaftlern auch geholfen, die strukturelle und funktionale Organisation des menschlichen Gehirns zu verstehen.

Was Sie benötigen

• Tier (Ratte oder Affe)
• Perfusionspumpe, Becherglas
• Fixierlösung (4 Prozent Paraformaldehyd)
• Spritzen Nadeln
• Perfusionstropfenset
• Schere
• Skalpell
• Pinzette
• 0,9 Prozent Kochsalzlösung
• Kühlbox

Anweisungen

1. Bereiten Sie frischen 4-prozentigen Paraformaldehyd vor, indem Sie 40 g Paraformaldehyd in 800 ml Wasser mischen. Erhitzen Sie die Lösung auf 60 °C unter Rühren. Kühlen Sie die Lösung auf 4 °C ab. Stellen Sie den pH-Wert mit Hilfe eines pH-Meters auf 9,5 ein. Zum Einstellen des pH-Wertes geben Sie Eisessig hinzu, um den gewünschten pH-Wert zu erhalten.

2. Stellen Sie die Perfusionspumpe auf; befestigen Sie alle Glasteile und eine Perfusionsnadel. Lassen Sie 100 ml Leitungswasser durch die Schläuche der Perfusionspumpe laufen, um Rückstände von den Glasteilen zu entfernen. Stellen Sie ein Becherglas mit Fixierlösung in eine Kühlbox.

3. Öffnen Sie das Ende des Perfusionsschlauchs und legen Sie es in ein Fixierbecherglas. Passen Sie das Volumen der Lösung entsprechend der Größe des Tieres an. Stellen Sie nun das Ventil der Perfusionspumpe auf ein langsames, gleichmäßiges Tropfen. Schließen Sie das Ventil. Füllen Sie das Perfusionsgerät mit 0,9 Prozent (Gewicht/Volumen) Kochsalzlösung.

4. Stellen Sie die Operationsinstrumente in der Nähe des Operationstisches auf. Geben Sie dem Tier eine Anesthesieinjektion entsprechend seinem Körpergewicht (Ketamin 0,5 mg/kg). Legen Sie das Tier mit dem Rücken nach unten auf den Operationstisch.

5. Machen Sie einen Schnitt mit einem Skalpell entlang der Länge des Zwerchfells. Schneiden Sie mit der großen Schere, stumpfe Seite nach unten, das Bindegewebe an der Unterseite des Zwerchfells durch. Legen Sie das Herz frei. Halten Sie das schlagende Herz mit der Pinzette und führen Sie eine Nadel in die linke Herzkammer ein.

6. Öffnen Sie das Ventil der Perfusionspumpe, um den Fluss von 0,9 Prozent Kochsalzlösung zu ermöglichen. Stellen Sie sicher, dass die Lösung frei fließt und das Tier lebt. Das Herz des Tieres sollte kontinuierlich schlagen. Sobald das Blut durch die Kochsalzlösung ersetzt wurde, wechseln Sie die Lösung auf 4 Prozent Paraformaldehyd.

7. Beenden Sie die Perfusion und präparieren Sie ein Gewebe von Interesse. Bewahren Sie das Gewebe im selben Medium bei 4 °C auf.