Die Rolle von kaltem Alkohol bei der DNA-Extraktion: Ein umfassender Leitfaden

Einleitung

Kalter Alkohol wird verwendet, um DNA aus wässrigen Lösungen zu trennen. Dies ermöglicht die Reinigung der DNA für anschließende genetische Tests. Das Hinzufügen von Alkohol zu einer Lösung, die DNA enthält, ist eine einfache Methode, um die erforderliche reine DNA zu gewinnen, und kältere Temperaturen verlangsamen Enzyme, die DNA abbauen können, was zu besseren Extraktionsergebnissen führt.

Zellwände aufbrechen

Extraktionsverfahren zur Gewinnung reiner DNA müssen alle molekularen und chemischen Bestandteile des Gewebes entfernen, aus dem die DNA extrahiert wird. Die ersten Schritte umfassen das Lysieren oder Zerstören der Zellwände. Dies kann mit einer Vielzahl chemischer Mittel geschehen, die für Zellmembranen ätzend sind, die DNA jedoch nicht schädigen. Zellen können auch soniziert, homogenisiert oder zermahlen werden, um Membranen zu zerstören.

Lipide entfernen

Sobald die Zellwände zerstört wurden, wird ein Reinigungsmittel hinzugefügt, um die Fette und Öle zu entfernen, die die Zellmembranen ausmachen. Reinigungsmittel bewirken, dass die Fette und Öle in der Lösung gelöst werden.

Proteine entfernen

Proteine und Enzyme können durch das Hinzufügen einer Protease zur Lösung verdaut werden. Proteasen bauen Proteine in kleine Peptide und Aminosäuren ab.

DNA fällen

Das Hinzufügen von kaltem Alkohol zu einer Lösung bewirkt, dass DNA ausfällt und sich aggregiert. Die DNA kann durch Zentrifugieren der Probe und Abgießen der Flüssigschicht gesammelt werden. Die DNA sollte als kleines Pellet am Boden der Zentrifugenröhre vorliegen.

DNA reinigen

Die DNA kann gewaschen werden, indem sie in einer kalten Alkohollösung neu aufgeschwemmt und mehrmals wieder zentrifugiert wird, um eine sehr reine DNA-Probe zu erhalten. Typische Alkohole zum Fällen von DNA sind Ethanol und Isopropanol. Dieser Prozess hinterlässt eine sehr reine Probe für strenge DNA-Tests.