Gewebekultur -Tipps

Gewebekultur ist die Ausbreitung der Zellen in einem flüssigen Nährmedium im Labor für verschiedene wissenschaftliche Zwecke . Zum Beispiel werden Gewebekulturen bei der Diagnose von genetischen Erkrankungen verwendet werden , als ein Medium zum Züchten von intrazellulären Pathogenen , wie Bakterien oder Viren oder in Untersuchungen in den Zellen selbst . Gewebekulturzellen

Einige Zellen auf dem Boden der Petrischale haften oder verbleiben in der Flüssigkeit suspendiert . Die Zellen können pflanzlichen oder tierischen Ursprungs sein. Zellen in Gewebekulturen verwendet werden, können primäre Zellen , was bedeutet, sie direkt aus einem Organismus entnommen oder aus einer Zelllinie, die in Kultur gehalten wurde. Zelllinien sind oft Krebszellen , und dies muss bei der Planung und Interpretation Experimente werden.
Gönnen Zellen vorsichtig

adhärenten Zellen werden aus ihrer Petrischale für den Durchgang von entfernt Schaben oder mit einer Protease , die allgemein Trypsin und EDTA . Scraping tötet viele Zellen und sollte nur verwendet werden , wenn die Vorbereitung Zelllysaten ( flüssige Zubereitungen von Zellinhalte für die Analyse ), oder wenn Trypsin /EDTA muss unbedingt vermieden werden .

Trypsinisierungsflaschen entfernt nicht nur die Proteine, die Zellen an der Schale haften aber die meisten anderen Proteine ​​auf der Membran der Zelle , zu. Cells Ball und nehmen Sie sich Zeit , in der Regel über Nacht , um eine Bindung mit dem Gericht wieder herzustellen. Zugabe einer minimalen Menge an Trypsin - um 1 ml einer 25cm2 -Kolben - Schütteln der Flasche für fünf Sekunden oder weniger zu beschichten und dann die Mono Abgießen oder Absaugen des überschüssigen Trypsin wird die Menge an Trypsin zu dem die Monoschicht freigelegt wird, zu verringern . Lassen Sie die Zellen im Brutschrank ruhen während der Trypsinierung .

Nachdem die Zellen den Boden der Schale rutschen , fügen Sie Medien mit Serum und saugen Sie den Lysat oben und unten die Pipette sanft. Lassen Sie ein wenig Medien, um in der Schale bleiben , wie Sie pipettieren und unten mehrmals auseinander zu brechen und sich ein Klumpen sogar Federung.

Blasen in die Pipette nicht ansaugen . Auch nicht kräftig mischen oder vortexen die Zellsuspension ; die Zellen in diesem geballte Zustand sehr zerbrechlich.
Um Wärme inaktivieren oder zu inaktivieren Nicht erhitzen

Wenn Zellkulturtechniken waren in den Kinderschuhen , fötalem Rinderserum ( FBS) war bekannt, Komplement-Proteine ​​, die das Immunsystem Proteine, Zellen lysieren enthalten . Komplement-Proteine ​​sind nicht erwünscht, in der Zellkultur . Hitze - Inaktivierung FBS bei 56 Grad Celsius für 30 Minuten wird machen Komplement-Proteine ​​inaktiv. Vorwärmen FBS auf 37 Grad C ist auch genug, um Komplement-Proteine ​​zu inaktivieren.

In den frühen Tagen , Wärme- Inaktivierung getötet FBS auch Mykoplasmen und anderen Verunreinigungen. Zu der Zeit wurde Filtersterilisation mit 0,45 um Filter durchgeführt. Heute , filtern wir sterilisieren FBS und Medien durch 0.1um oder sogar 0.04um Filter . Kein Mykoplasmen wird durch die rutsch

Dies lässt uns die Frage, ob oder nicht zu inaktivieren erhitzen

Hitzeinaktivierung degradiert alle Komponenten der FBS - . . Wie Vitamine, Aminosäuren und Wachstumsfaktoren - . möglicherweise unterhalb der Schwelle für einige pingelig Zelllinien

Wenn Sie mit einem langsam wachsenden oder pingelig Zelllinie arbeiten , betrachten lediglich auswählen, sterilisieren Ihre FBS . Vielleicht finden Sie, dies erhöht die Robustheit Ihrer Zellen .